Was ist Elisa -Erkennung?

Ein Enzym, das den Immunosorbent -Assay (ELISA) verknüpft hat, ist ein Test, der in einem Immunologie -Labor durchgeführt wurde, um Proteinspiegel in einer biologischen Stichprobe zu bestimmen.Die ELISA-Erkennung bezieht sich auf den letzten Schritt des Tests, bei dem eine klare Lösung oder ein Substrat zu einer plastischen Platte gegeben wird, die gebundenes enzymmarkiertes Antikörper enthält.Das Enzym spaltet das Substrat und es tritt eine Farbänderung auf.Die leichte Absorption der endgültigen farbigen Lösung wird dann an einem ELISA -Plattenleser oder einem Spektrophotometer gemessen.

Es gibt verschiedene Arten von ELISA -Tests, wobei die beiden häufigsten die indirekte Elisa und die Aufnahme oder Sandwich, ELISA sind.Die indirekte ELISA wird verwendet, um ein Protein, das als Antikörper bekannt ist, im Serum eines Patienten nachzuweisen.Ein Beispiel für einen indirekten ELISA -Test ist der HIV -Test (Human Immunodeficiency Virus), der zum Nachweis von Antikörpern gegen HIV verwendet wird.Der Sandwich -ELISA -Test erkennt ein Protein oder Antigen, indem es zwischen zwei Antikörpern erfasst wird.Nachweis des hormonischen Choriongonadotropin (HCG), das während der Schwangerschaft erhöht ist, erfolgt mit einem Sandwich -ELISA -Test.Dieser Schritt beinhaltet die Zugabe eines Antikörpers, der ein Enzymmolekül hat, das an sie gebunden ist.Nach Zugabe des enzym markierten Antikörpers wird eine farblose Lösung, die das für dieses Enzym spezifische Substratmolekül enthält, zugesetzt.Das Enzym spaltet das Substratmolekül und die Lösung ändert die Farbe in Abhängigkeit von der verwendeten Kombination.Die Bestimmung der Menge an Antikörper oder Antigen in der Patientenprobe erfolgt durch Messung der Intensität der Farbänderung.

Es gibt mehrere Enzymsubstratkombinationen für die Verwendung im ELISA -Nachweisschritt.Das häufigste Enzym ist Meerrettichperoxidase (HRP), das unter anderem die Substratmoleküle ortho-phenylendiamindihydrochlorid (OPD) und Tetramethylbenzidin (TMB) spalten kann.Die Spaltung sowohl von OPD als auch von TMB führt zu einer gelben Farbe, und die optische Dichte oder Absorption des Lichts dieser Substrate wird von einem ELISA -Plattenleser gemessen.Die Lichtabsorption von OPD wird bei einer Wellenlänge von 490 Nanometern (NM) gemessen, während TMB bei 450 nm gemessen wird.

Ein weiteres gemeinsames Enzym, das im ELISA -Nachweisschritt verwendet wird, ist die alkalische Phosphatase.Dieses Enzym wird mit dem Substrat P-Nitrophenylphosphat (PNPP) verwendet und erzeugt auch eine gelbe Lösung.PNPP absorbiert Licht bei einer Wellenlänge von 405 nm.

Selektion der Enzymsubstratkombinationen basiert normalerweise auf den im Handel erhältlichen Enzym-markierten Antikörpern sowie auf welchen Geräten zur Messung der Lichtabsorption verwendet werden.Die vielen Kombinationen, die für die ELISA -Erkennung verfügbar sind, machen den ELISA -Test sehr vielseitig.Es ist ein wichtiges Instrument für Krankheitstests und Forschungslabors.