Hvad er ELISA -detektion?

Et enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) er en test udført i et immunologilaboratorium for at bestemme niveauer af protein i en biologisk prøve.ELISA-detektion henviser til det sidste trin i testen, hvor en klar opløsning eller substrat tilsættes til en plastplade, der indeholder bundne enzymmærkede antistof.Enzymet spalter underlaget, og der opstår en farveændring.Lysabsorbans af den endelige farvede opløsning måles derefter på en ELISA -pladelæser eller spektrofotometer.

Der er forskellige typer af ELISA -tests, hvor de to mest almindelige er den indirekte ELISA og indfangningen eller sandwich, ELISA.Den indirekte ELISA bruges til at detektere et protein, kendt som et antistof, hos en patients serum.Et eksempel på en indirekte ELISA -test er den humane immundefektvirus (HIV) -test, der bruges til at påvise antistoffer mod HIV.Sandwich -ELISA -testen detekterer et protein eller antigen ved at fange det mellem to antistoffer.Påvisning af det hormoniske humane chorioniske gonadotropin (HCG), som er forhøjet under graviditet, udføres med en sandwich -ELISA -test.

Begge test har et ELISA -detektionstrin i slutningen af assayet.Dette trin involverer tilsætning af et antistof, der har et enzymmolekyle fastgjort til det.Efter tilsætning af det enzymmærkede antistof tilsættes en farveløs opløsning, der indeholder substratmolekylet specifikt for det enzym.Enzymet spalter underlagets molekyle, og opløsningen ændrer farve afhængigt af den anvendte kombination.Bestemmelse af mængden af antistof eller antigen i patientprøven udføres ved at måle intensiteten af farveændringen.

Der er flere enzymsubstratkombinationer, der er tilgængelige til brug i ELISA -detektionstrinnet.Det mest almindelige enzym er peberrodsperoxidase (HRP), som kan spalte substratmolekylerne ortho-phenylendiamindihydrochlorid (OPD) og tetramethylbenzidin (TMB), blandt andre.Spaltning af både OPD og TMB resulterer i en gul farve, og den optiske densitet eller absorbans af lyset af disse underlag måles ved en ELISA -pladelæser.Lysabsorbansen af OPD måles ved en bølgelængde på 490 nanometer (NM), mens TMB måles ved 450 nm.

Et andet almindeligt enzym, der anvendes i ELISA -detektionstrinnet, er alkalisk phosphatase.Dette enzym anvendes med substratet P-nitrophenylphosphat (PNPP) og producerer også en gul opløsning.PNPP absorberer lys ved en bølgelængde på 405 nm.

Valg af enzymsubstratkombinationer er normalt baseret på, hvad enzymmærkede antistoffer er kommercielt tilgængelige, samt hvilket udstyr der vil blive brugt til at måle lysabsorbans.De mange kombinationer, der er tilgængelige til ELISA -detektion, gør ELISA -testen meget alsidig.Det er et vigtigt værktøj til sygdomstest og forskningslaboratorier.