Vad är ELISA -protokollet?
En enzymbunden immunosorbentanalys (ELISA) är ett vanligt test som används i immunologi för att detektera antigener eller antikroppar.Antigener provocerar en immunsystemreaktion mdash;Med andra ord orsakar de sjukdomar.ELISA används för att upptäcka många bakteriella och virala antigener, inklusive humant immunbristvirus (HIV), malaria, kolera, mässling och kusma.Ett något annorlunda ELISA -protokoll kan användas för att upptäcka antikroppar mot dessa och många andra patogener.Ett ELISA-protokoll är steg-för-steg-förfarandet för att utföra en specifik ELISA.
Även om ELISA-protokollet varierar något, beroende på vilken typ av ELISA som utförs, är det grundläggande konceptet detsamma för dem alla.ELISA beror på enzymbundna antikroppar, även kallade antiglobuliner .En signalmolekyl bunden till dessa antiglobuliner orsakar ett substrat som tillsattes under analysen för att ändra färg, om det önskade antigenet eller antikroppen är närvarande.Mängden antigen eller antikropp närvarande är proportionell mot mängden färgförändring, som kan mätas med en elektronisk plattläsare.
Det finns tre huvudtyper av ELISA.En Direkt ELISA används vanligtvis för att detektera antigener snarare än antikroppar.Detta är det enklaste ELISA-protokollet, eftersom den enzymbundna antikroppen binder direkt till det önskade antigenet.Substrat tillsätts sedan för att bestämma mängden antigen närvarande.
En Indirekt ELISA används för att upptäcka antikroppar, medan en annan typ av indirekt ELISA mdash;kallas en Sandwich Elisa mdash;kan användas för att detektera antigener.Ett smörgås ELISA -protokoll kräver två antikroppar, kallade fångst- och detekteringsantikroppar, för att binda till det önskade antigenet.Ett antiglobulin tillsätts, som binder till detektionsantikroppen, och substratet tillsätts.Den indirekta ELISA följer ett liknande protokoll, men använder ett fångstantigen snarare än en fångstantikropp för att detektera den önskade antikroppen.
Konkurrenskraftig ELISA används ofta för att detektera antigener som finns i låga koncentrationer, eftersom det är en mycket mycketkänslig analys.Till skillnad från de andra ELISA-protokollen använder konkurrenskraftiga ELISA ett enzymbundet antigen istället för en antikropp och en något annorlunda kvantifieringsmetod.I det tillsätts provet som innehåller antigenet som ska detekteras och det enzymbundna antigenet till en antikropp, och de två antigenerna tävlar om antikroppsbindande ställen.När substratet tillsätts är färgförändringen större, med ett högre förhållande av bundna enzymbundna antigener för att binda provantigener.Detta innebär att högre färgförändring detekteras vid lägre koncentrationer av provantigenet, vilket är det som gör denna metod så känslig.