Was ist ein Ubiquitinierungsassay?

Ubiquitinierung bezieht sich auf die Bindung des Proteins Ubiquitin an andere Proteine durch drei verschiedene Enzyme.Ein Ubiquitinierungs -Assay ist ein Test, der feststellt, wie viel dieses Prozesses in der Zelle auftritt.Tests können verwendet werden, um zu bestimmen, wie unterschiedliche Bedingungen die Proteinbindung, Schritte und Strukturen beeinflussen, die im Ubiquitinnationsweg wichtig sind, und die Menge an Protein in der Zelle.Unzureichende oder übermäßige Beträge wurden mit der Entwicklung vieler verschiedener Krankheiten in Verbindung gebracht.

Ein in Zellen gefundenes Protein, die Funktion von Ubiquitin besteht darin, an Proteine zu binden und gleichzeitig als Tag oder Signal an andere Strukturen zu funktionieren.Dieses Tag signalisiert dann Enzyme, um zu wissen, dass das Protein zerstört, recycelt oder bewegt werden kann.Das Ergebnis ist die Zerstörung oder den Transport von Proteinen.

Diese Tagging -Proteine sind wichtig für DNA -Reparaturen, Virusinfektionen und Immunantwort.Andere wichtige Funktionen sind Rollen im Zelltod, die Zellteilung und die Entwicklung von Zellen.Zu viel Ubiquitin oder dessen Fehlen kann eine Rolle bei der Bildung vieler Krankheiten wie Krebs, genetischen Störungen und Krankheiten des Immunsystems spielen.

Forscher verwenden einen Ubiquitinierungs -Assay, um zu bestimmen, welche Bedingungen die Konzentration des Proteins in der Zelle verändern und erkrankte Zellen mit gesunden Zellen vergleichen.Wissenschaftler verwenden es auch, um zu untersuchen, welche Bedingungen eine Änderung der Bindung verursachen.Darüber hinaus können sie versuchen, den spezifischen DNA -Code mit der Anzahl der Enzyme in der Zelle zu verknüpfen.Man bestimmt den Prozentsatz der Proteine, die mit Ubiquintin gebunden sind.Ein anderer untersucht die Aktivität von Enzymen oder das Vorhandensein anderer Zwischenprodukte im Ubiquinierungsweg.Unterschiedliche Assays werden basierend auf dem Zielprotein entwickelt, an das Ubiquitin binden wird.

Die Grundlage eines Ubiquitinierungsassays besteht darin, eine Verbindung zu integrieren, die unter Verwendung einer anderen leicht gemessenen Chemikalie markiert wird.In Onkologie -Assays kann Ubiquitin mit Kryptat markiert werden, eine Verbindung, die zwei Stickstoffatome enthält.Dies kann verwendet werden, um zu bestimmen, welches Enzym in der Zelle am aktivsten ist.

Ein Ubiquitinierungsassay hat zwei Schritte.Der erste ist ein enzymatischer Schritt, bei dem Enzyme das markierte Ubiquitin an das Zielprotein binden.Der zweite ist ein Nachweisschritt, bei dem die Bindung des Zielproteins unter Verwendung eines Konjugats wie einem Antikörper untersucht wird.Der Antikörper fluoreszieren oder ändert die Farbe, wodurch der Forscher die Aktivität der Enzyme bestimmen kann.