Τι είναι η δοκιμασία ουβικιτινίωσης;

Η ουβικιτίνη αναφέρεται στη δέσμευση της πρωτεϊνικής ουβικιτίνης σε άλλες πρωτεΐνες με τρία διαφορετικά ένζυμα.Μια δοκιμασία ουβικιτινίωσης είναι μια δοκιμή που καθορίζει πόσο από αυτή τη διαδικασία εμφανίζεται μέσα στο κύτταρο.Οι δοκιμές μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον προσδιορισμό του τρόπου με τον οποίο οι διαφορετικές συνθήκες επηρεάζουν τη δέσμευση πρωτεϊνών, τα βήματα και τις δομές που είναι σημαντικές στην οδό ουβικιτίνης και η ποσότητα πρωτεΐνης στο κύτταρο.Τα ανεπαρκή ή υπερβολικά ποσά έχουν συνδεθεί με την ανάπτυξη πολλών διαφορετικών ασθενειών.

Μια πρωτεΐνη που βρίσκεται στα κύτταρα, η λειτουργία της ουβικιτίνης είναι να δεσμεύεται με πρωτεΐνες ενώ λειτουργεί ως ετικέτα ή σήμα σε άλλες δομές.Αυτή η ετικέτα σηματοδοτεί τα ένζυμα να γνωρίζουν ότι η πρωτεΐνη μπορεί να καταστραφεί, να ανακυκλωθεί ή να μετακινηθεί.Το αποτέλεσμα είναι η καταστροφή ή η μεταφορά πρωτεϊνών.

Αυτές οι πρωτεΐνες επισήμανσης είναι σημαντικές για την επισκευή του DNA, τις ιογενείς λοιμώξεις και την ανοσοαπόκριση.Άλλες σημαντικές λειτουργίες περιλαμβάνουν ρόλους στον κυτταρικό θάνατο, στην κυτταρική διαίρεση και στην ανάπτυξη κυττάρων.Η υπερβολική ουβικιτίνη, ή η έλλειψή τους, μπορεί να διαδραματίσει ρόλο στο σχηματισμό πολλών ασθενειών, όπως ο καρκίνος, οι γενετικές διαταραχές και οι ασθένειες του ανοσοποιητικού συστήματος.

Οι ερευνητές θα χρησιμοποιήσουν μια δοκιμασία ουβικιτινίωσης για να προσπαθήσουν να προσδιορίσουν ποιες συνθήκες μεταβάλλουν τη συγκέντρωση της πρωτεΐνης στο κύτταρο και συγκρίνοντας τα νοσούντα κύτταρα με υγιή κύτταρα.Οι επιστήμονες το χρησιμοποιούν επίσης για να διερευνήσουν ποιες συνθήκες θα προκαλέσουν αλλαγές στη δέσμευση.Επιπλέον, μπορεί να προσπαθήσουν να συνδέσουν συγκεκριμένο κώδικα DNA με την ποσότητα των ενζύμων στο κύτταρο.Κάποιος θα καθορίσει το ποσοστό των πρωτεϊνών που συνδέονται με την ubiquintin.Ένας άλλος εξετάζει τη δραστηριότητα των ενζύμων ή την παρουσία οποιωνδήποτε άλλων ενδιάμεσων που βρίσκονται στην οδό ουβικοροποίησης.Διαφορετικές δοκιμασίες αναπτύσσονται με βάση την πρωτεΐνη -στόχο που θα δεσμεύσει η ουβικιτίνη.

Η βάση μιας δοκιμασίας ουβικιτινίωσης είναι η ενσωμάτωση μιας ένωσης που επισημαίνεται χρησιμοποιώντας ένα άλλο εύκολα μετρημένο χημικό.Σε δοκιμασίες ογκολογίας, η ουβικιτίνη μπορεί να επισημανθεί με κρυπτογράφηση, μια ένωση που περιέχει δύο άτομα αζώτου.Αυτό μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να προσδιοριστεί ποιο ένζυμο είναι πιο ενεργό στο κύτταρο.

Μια δοκιμασία ουβικιτινίωσης θα έχει δύο βήματα.Το πρώτο είναι ένα ενζυματικό βήμα όπου τα ένζυμα θα δεσμεύουν την επισημασμένη ουβικιτίνη στην πρωτεΐνη -στόχο.Το δεύτερο είναι ένα βήμα ανίχνευσης στο οποίο η δέσμευση της πρωτεΐνης -στόχου εξετάζεται χρησιμοποιώντας συζευγμένο όπως ένα αντίσωμα.Το αντίσωμα θα φθορεύει ή θα αλλάξει χρώμα, το οποίο στη συνέχεια επιτρέπει στον ερευνητή να καθορίσει τη δραστηριότητα των ενζύμων.