Ano ang isang ubiquitination assay?

Ang ubiquitination ay tumutukoy sa pagbubuklod ng protina ubiquitin sa iba pang mga protina sa pamamagitan ng tatlong magkakaibang mga enzyme.Ang isang ubiquitination assay ay isang pagsubok na tumutukoy kung magkano ang prosesong ito ay nangyayari sa loob ng cell.Ang mga pagsubok ay maaaring magamit upang matukoy kung paano nakakaapekto ang iba't ibang mga kondisyon na nagbubuklod ng protina, mga hakbang at istruktura na mahalaga sa landas ng ubiquitinnation, at ang halaga ng protina sa cell.Ang hindi sapat o labis na halaga ay na -link sa pag -unlad ng maraming iba't ibang mga sakit.

Ang isang protina na matatagpuan sa mga cell, ang pag -andar ng ubiquitin ay upang magbigkis sa mga protina habang gumagana bilang isang tag o signal sa iba pang mga istraktura.Ang tag na ito pagkatapos ay nagpapahiwatig ng mga enzyme upang malaman na ang protina ay maaaring masira, mai -recycle, o ilipat.Ang resulta ay ang pagkawasak o transportasyon ng mga protina.

Mahalaga ang mga tag na protina na ito para sa pag -aayos ng DNA, impeksyon sa virus at tugon ng immune.Ang iba pang mahahalagang pag -andar ay may kasamang mga tungkulin sa kamatayan ng cell, cellular division at pag -unlad ng mga cell.Masyadong maraming ubiquitin, o kakulangan nito, ay maaaring magkaroon ng papel sa pagbuo ng maraming mga sakit, tulad ng cancer, genetic disorder at sakit ng immune system.

Gumagamit ang mga mananaliksik ng isang ubiquitination assay upang subukang matukoy kung aling mga kondisyon ang nagbabago sa konsentrasyon ng protina sa cell at paghahambing ng mga may sakit na mga cell na may malusog na mga cell.Ginagamit din ito ng mga siyentipiko upang siyasatin kung anong mga kondisyon ang magiging sanhi ng mga pagbabago sa pagbubuklod.Bilang karagdagan, maaari nilang subukan na maiugnay ang mga tukoy na code ng DNA na may halaga ng mga enzyme sa cell.

Mayroong higit sa isang uri ng ubiquitination assay na partikular na ginagamit ng mga siyentipiko.Matutukoy ng isa ang porsyento ng mga protina na nakasalalay sa ubiquintin.Sinusuri ng isa pang aktibidad ng mga enzymes o ang pagkakaroon ng anumang iba pang mga tagapamagitan na matatagpuan sa path ng ubiquination.Ang iba't ibang mga assays ay binuo batay sa target na protina na ibubuklod ng ubiquitin.

Ang batayan ng isang ubiquitination assay ay upang isama ang isang tambalan na may label gamit ang isa pang madaling sinusukat na kemikal.Sa Oncology Assays, ang ubiquitin ay maaaring may label na may cryptate, isang tambalan na naglalaman ng dalawang mga atomo ng nitrogen.Maaari itong magamit upang matukoy kung aling enzyme ang pinaka -aktibo sa cell.

Ang isang ubiquitination assay ay magkakaroon ng dalawang hakbang.Ang una ay isang hakbang na enzymatic kung saan ang mga enzyme ay magbubuklod sa may label na ubiquitin sa target na protina.Ang pangalawa ay isang hakbang sa pagtuklas kung saan ang pagbubuklod ng target na protina ay sinuri gamit ang isang conjugate tulad ng isang antibody.Ang antibody ay fluoresce, o magbabago ng kulay, na pagkatapos ay pinapayagan ang mananaliksik na matukoy ang aktibidad ng mga enzyme.