Τι είναι η ηλεκτροφόρηση 2D Gel;

Η ηλεκτροφόρηση με δισδιάστατη (2D) πηκτής είναι μια μέθοδος που χρησιμοποιούν οι επιστήμονες για να απομακρύνουν και να αναλύουν τα μείγματα πρωτεϊνών διαχωρίζοντας πρώτα τις ζώνες πρωτεϊνών σε δύο διαφορετικούς άξονες.Είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται συχνότερα όταν ασχολείται με περίπλοκα ή παχιά μίγματα πρωτεϊνών, συχνά με αλληλεπικαλυπτόμενα μεγέθη πρωτεϊνών.Η ηλεκτροφόρηση 2D πηκτής διαφέρει από την μονοδιάστατη ηλεκτροφόρηση πηκτής επειδή η πρώην μέθοδος χρησιμοποιεί διαχωρισμό πρωτεϊνών που βασίζονται σε δύο διαφορετικά χαρακτηριστικά πρωτεΐνης, ενώ η μονοδιάστατη ηλεκτροφόρηση πηκτής διαχωρίζει συνήθως πρωτεΐνες με βάση ένα μοναδικό χαρακτηριστικό, όπως το μέγεθος της πρωτεΐνης.Χρησιμοποιείται στην έρευνα για να διαχωριστούν τα μόρια χρησιμοποιώντας το γεγονός ότι πολλά βιολογικά μόρια, όπως το DNA, έχουν ηλεκτρικό φορτίο.Αυτό το γεγονός μπορεί να χρησιμοποιηθεί προς όφελος των επιστημόνων, επειδή τα φορτισμένα μόρια μπορούν να διαχωριστούν από το μέγεθος μέσω ενός πορώδους υποστρώματος όπως η αγαρόζη εφαρμόζοντας μια κλίση τάσης σε ένα πορώδες, ιοντικό πήκτωμα.Με την πάροδο του χρόνου, τα μόρια θα περάσουν από αυτό το πήκτωμα, προς το φορτίο που είναι αντίθετο με το φυσικό φορτίο του μορίου.Τα μικρά μόρια και τα έντονα φορτισμένα μόρια κινούνται ταχύτερα από τα μεγάλα μόρια ή τις πρωτεΐνες που φορτίζονται ασθενώς.Σε ηλεκτροφόρηση 2D πηκτής, αφού διαχωρίζονται οι πρωτεΐνες μέσω ενός μόνο χαρακτηριστικού, το οποίο δημιουργεί μια κλίση, ένα πήκτωμα μπορεί στη συνέχεια να γυρίσει πλάγια για να διαχωριστούν εκείνες οι ζωνές που προέρχονται από προηγουμένως βασισμένες σε ένα δεύτερο χαρακτηριστικό.Χαρακτηριστικό με το οποίο τα συσσωματώματα πρωτεϊνών μπορούν να διαχωριστούν σε πρωτεΐνες ενός συστατικού.Η πρωτεϊνική μάζα είναι ένα άλλο κοινό χαρακτηριστικό που χρησιμοποιείται για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών σε ηλεκτροφόρηση 2D πηκτής.Αφού εκτελούνται πρωτεΐνες σε ένα πήκτωμα μέσω μιας μόνο λωρίδας σε μονοδιάστατη ηλεκτροφόρηση πηκτής, αυτό το πήκτωμα μπορεί στη συνέχεια να περιστρέφεται σε φυγόκεντρο, τραβώντας τις βαρύτερες πρωτεΐνες κάτω από τις μικρότερες, λιγότερο μαζικές πρωτεΐνες.Η κατεύθυνση της έλξης είναι κάθετη προς την κατεύθυνση που οι πρωτεΐνες τραβήχτηκαν μέσω του πηκτώματος λόγω έλξης σε ένα ηλεκτρικό φορτίο μέσω κλίσης τάσης. Η ηλεκτροφόρηση έχει πολλές χρήσεις σε μοριακές μελέτες, συμπεριλαμβανομένου του διαχωρισμού των πρωτεϊνών που βασίζονται σε συνθετικά χαρακτηριστικά, όπως η πρωτεΐνη, όπως η πρωτεΐνη, όπως η πρωτεΐνη.Ετικέτα.Ο διαχωρισμός πρωτεϊνών που βασίζεται σε χαρακτηριστική μάζα χρησιμοποιείται επίσης όταν οι πρωτεΐνες επισημαίνονται με άλλα μόρια.Αυτή η τεχνική μπορεί να χρησιμοποιηθεί με αυτά τα σύμπλοκα πρωτεϊνών, επειδή οι πρωτεΐνες με ετικέτα θα πέσουν πιο εύκολα μέσω ενός πηκτώματος από τις μη επισημασμένες πρωτεΐνες. Ενώ πολλά πηκτώματα διαχωρισμού σε εργαστήρια είναι κατασκευασμένα από αγαρόζη, ο διαχωρισμός πρωτεϊνών με 2D ηλεκτροφόρηση πηκτής γίνεται καλύτερα σε πηκτώματα πολυακρυλαμιδίου.Αυτοί οι τύποι πηκτωμάτων χρησιμοποιούνται σε κηλίδες Western και σε άλλες δοκιμασίες με βάση το μέγεθος πρωτεΐνης.Η αγαρόζη χρησιμοποιείται συχνότερα για τον διαχωρισμό των τμημάτων DNA.