Quelles sont les différentes méthodes de détermination de la concentration des protéines?

Il existe des centaines de méthodes différentes de détermination de la concentration des protéines.L'incroyable diversité des types de solutions protéiques que les biochimistes analysent est la raison pour laquelle il n'y a pas de méthode universelle unique qui fonctionne pour chaque type de solution protéique.Les tests de protéines les plus courants sont le test Bradford, le test Lowry et le test d'acide bicinchoninique.Néanmoins, une myriade de variations ont été développées au besoin pour contourner toute incompatibilités chimiques potentielles entre la solution protéique et les réactifs qui sont utilisés dans le test.

D'une manière générale, il existe deux principales catégories de tests pour la détermination de la concentration des protéines.Dans le premier groupe de méthodes, un colorant coloré ou fluorescent est ajouté à une solution de protéines, et il se lie spécifiquement aux protéines.Le colorant lié a une longueur d'onde d'absorption unique qui est proportionnelle à la quantité de protéines.En utilisant un spectromètre, il devient possible d'estimer la concentration de protéine.

Le deuxième groupe de tests consiste à ajouter des ions cuivre (II) à une solution de protéine, où ces ions sont réduits en ions cuivrés (I).Ces ions réduits sont ensuite capables de former des complexes colorés en se liant aux protéines.En mesurant les absorbances à leurs longueurs d'onde uniques, les concentrations de protéines peuvent également être déduites.

L'une des méthodes les plus populaires de détermination de la concentration des protéines est le test Bradford.Dans ce test, un colorant rouge appelé Coomassie Brilliant Blue est ajouté à une solution de protéines dans des conditions acides.Comme ce colorant se lie aux protéines, il forme un complexe bleu permanent avec une absorbance caractéristique à 595 nanomètres.

Malgré la polyvalence générale du test Bradford, il est incompatible avec certaines solutions protéiques.En particulier, le test Bradford est perturbé par la présence de dodécyl sulfate de sodium (SDS), un détergent qui est couramment utilisé pour purifier les protéines et décomposer les cellules par lyse.Ce détergent interfère avec la liaison du colorant aux protéines, ce qui se traduit par une lecture d'absorption peu fiable et inexacte.D'autres types de méthodes doivent donc être utilisés lorsque SDS est présent.

Une autre série de tests de protéines a été développée, et elles impliquent toutes une variation du test Biuret.Dans cette réaction, une protéine est combinée avec une base aqueuse et des ions cuivre (II).Ces ions sont réduits puis chélés par des protéines pour former des complexes colorés.Deux tests qui utilisent ce test sont le test Lowry et le test d'acide bicinchoninique.

Avec le test Lowry, un réactif Folin-Ciocalteu est ajouté au test Biuret.Le réactif Folin-Ciocalteu oxyde les résidus aromatiques, en particulier le tryptophane, et aide le complexe à absorber fortement à 750 nanomètres.Le test d'acide bicinchoninique, en revanche, consiste à ajouter de l'acide bicinchoninique au test de Biuret.Après une brève incubation à environ 104 deg;Fahrenheit (40 deg; Celsius), deux équivalents d'acide et les liaisons peptidiques de la protéine chélate un seul ion cuivre (I).Le résultat est un complexe qui absorbe fortement à 562 nanomètres.

Lors de la sélection d'une méthode de détermination de la concentration des protéines, il est important pour l'un de considérer les différents groupes fonctionnels chimiques présents dans la solution.La présence de certaines chaînes latérales d'acides aminés, des liaisons disulfure et des cofacteurs peut rendre la détermination de la concentration en protéines sauvagement inexacte.Il est souvent nécessaire pour que quelqu'un considère non seulement les protéines mais aussi d'autres réactifs et tampons, tels que la réduction des agents et des détergents.La méthode idéale sera chimiquement compatible et sera fiable, bon marché et simple à configurer.