Quali sono i diversi metodi di determinazione della concentrazione proteica?

Esistono centinaia di diversi metodi di determinazione della concentrazione proteica.L'incredibile diversità nei tipi di soluzioni proteiche che i biochimisti analizzano è il motivo per cui non esiste un singolo metodo universale che funzioni per ogni tipo di soluzione proteica.I test proteici più comuni sono il test Bradford, il test Lowry e il test di acido bicinchoninico.Tuttavia, una miriade di variazioni sono state sviluppate se necessario per aggirare qualsiasi potenziale incompatibilità chimica tra la soluzione proteica e i reagenti che vengono utilizzati nel test.

In generale, ci sono due principali categorie di test per la determinazione della concentrazione di proteina.Nel primo gruppo di metodi, un colorante colorato o fluorescente viene aggiunto a una soluzione proteica e si lega specificamente alla proteina.Il colorante legato ha una lunghezza d'onda di assorbimento unica proporzionale alla quantità di proteina.Usando uno spettrometro, diventa possibile stimare la concentrazione di proteina.

Il secondo gruppo di test prevede l'aggiunta di ioni di rame (II) a una soluzione di proteina, in cui questi ioni sono ridotti a ioni di rame (i).Questi ioni ridotti sono quindi in grado di formare complessi colorati legandosi alle proteine.Misurando le assorbanze alle loro lunghezze d'onda uniche, anche le concentrazioni di proteine possono essere dedotte.

Uno dei metodi più popolari di determinazione della concentrazione proteica è il test Bradford.In questo test, una tintura rossa chiamata Coomassie Brilliant Blue viene aggiunta a una soluzione proteica in condizioni acide.Poiché questo colorante si lega alla proteina, forma un complesso blu permanente con un'assorbanza caratteristica a 595 nanometri.

Nonostante la versatilità generale del test Bradford, è incompatibile con alcune soluzioni proteiche.In particolare, il test Bradford è interrotto dalla presenza di dodecil solfato di sodio (SDS), un detergente comunemente usato per purificare le proteine e abbattere le cellule mediante lisi.Questo detergente interferisce con il legame del colorante alle proteine, il che si traduce in una lettura di assorbimento inaccurata e inaccurata.Altri tipi di metodi, quindi, devono essere utilizzati quando è presente SDS.

È stata sviluppata un'altra serie di saggi proteici e tutti comportano una variazione del test Biuret.In questa reazione, una proteina è combinata con una base acquosa e ioni di rame (II).Questi ioni sono ridotti e quindi chelati dalle proteine per formare complessi colorati.Due saggi che utilizzano questo test sono il test Lowry e il test dell'acido bicinchoninico.

Con il test Lowry, un reagente Folin-Ciocalteu viene aggiunto al test Biuret.Il reagente di Folin-ciocalteu ossida i residui aromatici, in particolare il triptofano, e aiuta il complesso ad assorbire fortemente 750 nanometri.Il test dell'acido bicinchoninico, d'altra parte, prevede l'aggiunta di acido bicinchoninico al test del biuret.Dopo una breve incubazione a circa 104 e deg;Fahrenheit (40 deg; Celsius), due equivalenti di acido e i legami peptidici del chelato proteico un singolo ione di rame (I).Il risultato è un complesso che assorbe fortemente a 562 nanometri.

Quando si seleziona un metodo per la determinazione della concentrazione di proteina, è importante considerare i diversi gruppi funzionali chimici presenti nella soluzione.La presenza di alcune catene laterali di aminoacidi, legami disolfuro e cofattori può rendere la determinazione della concentrazione proteica selvaggiamente inaccurata.Spesso è necessario che si consideri non solo le proteine ma anche altri reagenti e tamponi, come ridurre gli agenti e i detergenti.Il metodo ideale sarà chimicamente compatibile e sarà affidabile, economico e semplice da configurare.