Mi a fluoreszcens in situ hibridizációs technika?
A fluoreszcens in situ hibridizációt, más néven fluoreszcencia in situ hibridizációt, gyakrabban halaknak nevezik.Ez egy olyan technika, amely magában foglalja egy rövid DNS szál használatát, amelyet fluoreszcens festékkel jelöltek a genetikai rendellenességek kimutatására.A FISH lehetővé teszi a vizsgálók számára, hogy gyorsan és pontosan megjelenítsék a kromoszómákat, a kromoszómák részeit vagy a specifikus géneket.Ezt gyakran használják bizonyos betegségek, különösen a rákok prognózisának és kezelésének meghatározására.
A halakat a kromoszómák rendellenességeinek meghatározására használják.Ide tartozhatnak a kromoszómális deléciók, átrendeződések vagy transzlokációk, amelyekben két kromoszóma váltott a szegmensekre.A FISH lehetővé teszi a vizsgálók számára, hogy megjelenítsék a specifikus géneket.Meg tudja határozni, hogy van -e egy bizonyos gén, ahol a kromoszómákon található, és ha több példány van jelen.Ezt géntérképezésnek hívják.
Egy személy genetikai sminkje a DNS -ben található, amely az összes sejt magjában található.A DNS -nek két szála van, amelyek kiegészítik egymást.Más szavakkal, olyan molekuláknak nevezik, amelyeket alappároknak hívnak, amelyek pontosan összeegyeztethetők.A gének olyan DNS szegmensei, amelyeknek bizonyos bázispárok szekvenciája van, és a kromoszómák meghatározott területein helyezkednek el.A gének örököltek és meghatározzák, hogy a sejtek hogyan működnek, de mutatizálódhatnak is, ha a DNS -bázispárok szekvenciája megváltozik.
A fluoreszcens in situ hibridizációs technika kihasználja a DNS szálak ingyenes jellegét.A nyomozók először szondát hoznak létre.Ez egy rövid, egyetlen DNS -szál, amely ingyenes a genetikai szekvenciához, amelyet a kutató keres.A szondát ezután egy fluoreszcens festékhez jelöljük vagy rögzítik.A mintát melegítjük, hogy denaturáljuk a DNS -t a sejtek magjában.Ez azt jelenti, hogy a DNS kettős szálai a minta sejtekben szétesnek, hogy egyetlen szálak képződjenek.Ezután egy specifikus halszondát hibridizálunk a mintával.Más szavakkal, a szonda egyetlen szálát vezetik be, és összeolvad az ingyenes egyszálral a denaturált mintasejtekben.
Különleges fluoreszcens mikroszkóppal a kutató a mintát vizsgálja.Ha a specifikus gén vagy a kromoszóma jelen van a minta sejtekben, akkor fluoreszkáló fényként jelenik meg a sötétebb háttérrel.A kutatók könnyen megnézhetik, hogy a gén jelen van -e vagy sem, és ha van, akkor a gén hány példánya van az egyes sejtekben.Ha a kutató egy gén helyét keresi, akkor láthatja, hogy hol van a kromoszómán.A rendszeres fénymikroszkóp nem használható halakkal, mert a fluoreszcens festék nagyon alacsony fényszintet eredményez.
A DNS -hibridizáció szondákkal történő alkalmazását először az 1960 -as években hajtották végre;A szondákat azonban radioaktív anyagokkal jelöltük, nem pedig fluoreszcens.Ennek több problémája volt.A radioaktív anyagok természetüknél fogva instabilok, veszélyesek és speciális protokollokat igényelnek az ártalmatlanításhoz.Hosszú időbe telik a hibridizált szonda által kibocsátott radioaktív jel mérése is.A fluoreszcens in situ hibridizációs technika legyőzi ezen akadályok nagy részét.
Ha a vizsgálók tudják, milyen gént keresnek, a halak gyors és pontosak annak megtalálásakor.A halak akkor is elvégezhetők, ha a sejteket nem osztják el aktívan, és konkrétabb információkat nyújt a kromoszómák rendellenességeiről.A hagyományosabb technikák, például a karotiping, egyszerűen mondják el a vizsgálóknak a cellán belüli kromoszómák számát és méretét.
A fluoreszcens in situ hibridizáció hátrányokkal jár.Mivel a halak kulcsa az alappár szekvenciájának és/vagy a gén elhelyezkedésének ismerete, nem használható általános szűrőeszközként.Ugyancsak drágább, mint más, kevésbé specifikus technikák, és lehet, hogy nem minden laboratóriumban vagy kórházban elérhetők./p
A fluoreszcens in situ hibridizáció előnyeit és hátrányait a legjobban példa írja le.A halakat rutinszerűen használják az emlőrák diagnosztizálásában annak meghatározására, hogy a betegnek több másolata van -e a HER2 -nek nevezett génből.Ez általában az emlőrák agresszívebb formáját jelzi, és hogy a betegnek kezelésének részeként bizonyos gyógyszereket kell kapnia.A halak ehhez használhatók, mert a HER2 gén bázispár szekvenciája és kromoszómális elhelyezkedése ismert.Ezzel szemben a halak nem használhatók annak meghatározására, hogy az ismeretlen gén vagy gének mi okozta az emlőrákot, vagy általában az emlőrák szűrésére.