Τι είναι το πρωτόκολλο ELISA;

Μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) είναι μια κοινή δοκιμή που χρησιμοποιείται στην ανοσολογία για την ανίχνευση αντιγόνων ή αντισωμάτων.Τα αντιγόνα προκαλούν αντίδραση ανοσοποιητικού συστήματος mdash;Με άλλα λόγια, προκαλούν ασθένειες.Η ELISA χρησιμοποιείται για την ανίχνευση πολλών βακτηριακών και ιικών αντιγόνων, συμπεριλαμβανομένου του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV), της ελονοσίας, της χολέρας, της ιλαράς και των παρωτίτιδων.Ένα ελαφρώς διαφορετικό πρωτόκολλο ELISA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση αντισωμάτων σε αυτά και σε πολλά άλλα παθογόνα.Ένα πρωτόκολλο ELISA είναι η διαδικασία βήμα προς βήμα για την εκτέλεση μιας συγκεκριμένης ELISA.Η ELISA εξαρτάται από αντισώματα συνδεδεμένα με ένζυμο, που ονομάζονται επίσης αντιγλοβουλίνες .Ένα μόριο σήματος που συνδέεται με αυτές τις αντιγεβουλίνες προκαλεί ένα υπόστρωμα που προστίθεται κατά τη διάρκεια της δοκιμασίας για να αλλάξει το χρώμα, εάν υπάρχει το επιθυμητό αντιγόνο ή αντίσωμα.Η ποσότητα αντιγόνου ή αντισώματος που υπάρχει είναι ανάλογη με την ποσότητα της αλλαγής χρώματος, η οποία μπορεί να μετρηθεί με έναν ηλεκτρονικό αναγνώστη πλάκας.

Υπάρχουν τρεις κύριοι τύποι ELISA.Ένα άμεση ELISA χρησιμοποιείται συνήθως για την ανίχνευση αντιγόνων και όχι τα αντισώματα.Αυτό είναι το απλούστερο πρωτόκολλο ELISA, καθώς το ενζυμικό συνδεδεμένο αντίσωμα δεσμεύεται απευθείας με το επιθυμητό αντιγόνο.Στη συνέχεια προστίθεται υπόστρωμα για τον προσδιορισμό της ποσότητας του αντιγόνου που υπάρχει.που ονομάζεται

σάντουιτς

elisa mdash;Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση αντιγόνων.Ένα πρωτόκολλο ELISA σάντουιτς απαιτεί δύο αντισώματα, που ονομάζονται αντισώματα σύλληψης και ανίχνευσης, να δεσμεύονται με το επιθυμητό αντιγόνο.Προστίθεται μια αντιγλοβουλίνη, η οποία δεσμεύεται με το αντίσωμα ανίχνευσης και προστίθεται το υπόστρωμα.Η έμμεση ELISA ακολουθεί ένα παρόμοιο πρωτόκολλο, αλλά χρησιμοποιεί ένα αντιγόνο σύλληψης και όχι ένα αντίσωμα σύλληψης προκειμένου να ανιχνευθεί το επιθυμητό αντίσωμα.

Ανταγωνιστικό

ELISA χρησιμοποιείται συχνά για την ανίχνευση αντιγόνων που υπάρχουν σε χαμηλές συγκεντρώσεις, επειδή είναι πολύ πολύευαίσθητη δοκιμασία.Σε αντίθεση με τα άλλα πρωτόκολλα ELISA, η ανταγωνιστική ELISA χρησιμοποιεί ένα ενζυμικό αντιγόνο αντί για ένα αντίσωμα και μια ελαφρώς διαφορετική μέθοδο ποσοτικοποίησης.Σε αυτό, το δείγμα που περιέχει το αντιγόνο που πρόκειται να ανιχνευθεί και το αντιγόνο που συνδέεται με ένζυμο προστίθενται και τα δύο σε ένα αντίσωμα και τα δύο αντιγόνα ανταγωνίζονται για θέσεις δέσμευσης αντισώματος.Όταν προστίθεται το υπόστρωμα, η αλλαγή χρώματος είναι μεγαλύτερη, με υψηλότερη αναλογία δεσμευμένων ενζυμικών αντιγόνων σε δεσμευμένα αντιγόνα δείγματος.Αυτό σημαίνει ότι ανιχνεύεται υψηλότερη αλλαγή χρώματος σε χαμηλότερες συγκεντρώσεις του αντιγόνου του δείγματος, πράγμα που κάνει αυτή τη μέθοδο τόσο ευαίσθητη.