Apa itu Protokol ELISA?
Uji imunosorben terkait enzim (ELISA) adalah tes umum yang digunakan dalam imunologi untuk mendeteksi antigen atau antibodi.Antigen memprovokasi reaksi sistem kekebalan mdash;Dengan kata lain, mereka menyebabkan penyakit.ELISA digunakan untuk mendeteksi banyak antigen bakteri dan virus, termasuk human immunodeficiency virus (HIV), malaria, kolera, campak, dan gondok.Protokol ELISA yang sedikit berbeda dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi untuk ini dan banyak patogen lainnya.Protokol ELISA adalah prosedur langkah demi langkah untuk melakukan ELISA tertentu.
Meskipun protokol ELISA sedikit berbeda, tergantung pada jenis ELISA yang dilakukan, konsep dasarnya sama untuk semuanya.ELISA tergantung pada antibodi terkait enzim, juga disebut antiglobulin .Molekul sinyal yang melekat pada antiglobulin ini menyebabkan substrat yang ditambahkan selama pengujian berubah warna, jika ada antigen atau antibodi yang diinginkan.Jumlah antigen atau antibodi yang ada sebanding dengan jumlah perubahan warna, yang dapat diukur dengan pembaca pelat elektronik.
Ada tiga jenis utama ELISA.A
Elisa langsung biasanya digunakan untuk mendeteksi antigen daripada antibodi.Ini adalah protokol ELISA yang paling sederhana, karena antibodi terkait enzim mengikat langsung ke antigen yang diinginkan.Substrat kemudian ditambahkan untuk menentukan jumlah antigen yang ada.an tidak langsung ELISA digunakan untuk mendeteksi antibodi, sedangkan jenis lain dari ELISA MDASH tidak langsung;disebut sandwich
elisa mdash;dapat digunakan untuk mendeteksi antigen.Protokol sandwich ELISA membutuhkan dua antibodi, yang disebut antibodi penangkapan dan deteksi, untuk mengikat antigen yang diinginkan.Antiglobulin ditambahkan, yang berikatan dengan antibodi deteksi, dan substrat ditambahkan.ELISA tidak langsung mengikuti protokol yang sama, tetapi menggunakan antigen penangkapan daripada antibodi penangkapan untuk mendeteksi antibodi yang diinginkan.Kompetitif
ELISA sering digunakan untuk mendeteksi antigen yang ada dalam konsentrasi rendah, karena sangatuji sensitif.Berbeda dengan protokol ELISA lainnya, ELISA kompetitif menggunakan antigen terkait enzim alih-alih antibodi, dan metode kuantifikasi yang sedikit berbeda.Di dalamnya, sampel yang mengandung antigen yang akan dideteksi dan antigen terkait enzim keduanya ditambahkan ke antibodi, dan dua antigen bersaing untuk situs pengikatan antibodi.Ketika substrat ditambahkan, perubahan warna lebih besar, dengan rasio lebih tinggi dari antigen terkait enzim terikat terhadap antigen sampel terikat.Ini berarti bahwa perubahan warna yang lebih tinggi terdeteksi pada konsentrasi antigen sampel yang lebih rendah, yang membuat metode ini sangat sensitif.