Mi a peptid tisztítása?

A peptidek kis polimerek aminosavakból állnak.Sokan biológiailag aktív, mint hormonok, méreganyagok, vagy más képességekkel rendelkeznek.Az ilyen vegyületeket gyakran használják biológiai, orvosi és kémiai kutatásokban.Ezek a fehérjék építőkövei is szolgálnak, amikor ezek száma összekapcsolódik.A peptid tisztítása egy olyan módszer, amellyel a kívánt peptid nagy mennyiségének megtisztítására szolgál, vagy a fehérjék emésztéséből előállított peptidek elválasztására.Különösen a fizikai mátrixtól.A nagynyomású folyadékkromatográfiát (HPLC) általában használják a peptid tisztításához.A peptidet vagy a peptideket oldószerek keverékében alkalmazzuk, amely idővel megváltozik, amikor nagy nyomáson egy kis gyöngy oszlopán szivattyúzzák őket.Különböző peptidek eluálódnak különböző időpontokban, és egy monitor segítségével detektálják őket, gyakran UV spektrofotométerrel.Ha a kívánt peptid szerkezete ismert, akkor gyakran könnyebb kémiailag előállítani a peptid szintézist, mint a vegyületet a természetes forrásokból.A természetes termékek elkülönítése hírhedten nehéz.A szintetikus peptideket általában HPLC -vel tisztítják.

Az ilyen kémiai szintézis félelmetes lehet egy független kutató számára, aki nem kémikus.Gyakran ezt a feladatot a peptid -szintézis társaságokhoz kötik, amelyek ezekre a technikákra szakosodtak.Lehet, hogy ez gazdaságosabb, mint a laboratóriumban a semmiből a semmiből történő beállítása.A peptidvállalatok a kutató igényeihez igazíthatják az egyedi peptideket.

A peptid tisztításának másik oka lehet, ha egy kutató megtisztította a fehérjét, és megpróbálja meghatározni annak identitását.A fehérjét peptidfragmensekké bonthatja, tisztítással elválaszthatja a fragmenseket, és a peptidek fragmentációs mintázatát tömegspektrométerrel detektálják, amikor az oszlopból eluálódnak.Ez a technika LC-MS néven ismert, rövid a folyékony kromatográfiás-tömeg spektrometriához.Ez megadja a fragmensek molekulatömegét és aminosav -összetételét, és gyakran lehetővé teszi a fehérjék azonosítását, ha hasonló vagy azonos módon azonosítottak.Próbáljon meg megtalálni azokat, amelyek szokatlan biológiai tevékenységekkel rendelkeznek.Van egy egész mező, amelyet peptidomimetikumnak neveznek, amely az ilyen új peptidek tanulmányozására szolgál.Gyakran megtervezték a számítógéppel generált szekvenciákat, és szintetizálnak egy peptid könyvtárat, amely magában foglalja az atipikus peptidek tartományát.A peptid tisztítását a könyvtár egyes tagjainak elválasztására használják, hogy tiszta peptidet biztosítsanak a biológiai aktivitás vizsgálatához.Ez a stratégia sikeres volt legalább egy új, kereskedelemben kapható gyógyszer előállításában.A kereskedelemben használt vegyületeket, például az inzulint általában rekombináns DNS -expressziós rendszerek termelik, amelyek nagy mennyiségű kívánt vegyületet termelnek.Gyakran a peptideket genetikailag úgy tervezik, hogy megkönnyítsék a tisztítást azáltal, hogy valamilyen címkét adnak a fronthoz.Ez lehetővé teszi az affinitás kromatográfiájának alkalmazását a peptid tisztításához.

Az ilyen típusú kromatográfiával a TAG egy olyan vegyület, mint a hisztidin, amely egy gyöngy mátrixát köti, mint például a nikkel, amelyet a címke kötésének képességére választanak.A nem kívánt fehérjék és peptidek általában kötés nélkül áthaladnak az oszlopon.A kifejezetten megtervezett peptid általában erősen kötődik az oszlophoz.Miután a szennyező fehérjéket és a peptideket lemosták, a kívánt peptidet egy vegyület eluálja, amely versenyez a T -hez való kötődésértŐ mátrix.Az egyik akkor meglehetősen tiszta előkészítéssel rendelkezik a kívánt peptidről, és a címke hasítással eltávolítható.