Apa itu pemurnian peptida?

Peptida adalah polimer kecil yang terdiri dari asam amino.Banyak yang aktif secara biologis sebagai hormon, racun, atau memiliki kemampuan lain.Senyawa tersebut sering digunakan dalam penelitian biologis, medis, dan kimia.Mereka juga berfungsi sebagai blok bangunan protein ketika jumlahnya dihubungkan bersama.Pemurnian peptida adalah teknik yang digunakan untuk memurnikan sejumlah besar peptida yang diinginkan, atau untuk membantu memisahkan peptida yang dihasilkan dari pencernaan protein.

Pemurnian peptida dilakukan dengan menggunakan teknik kromatografi, cara memisahkan senyawa yang mengikatberbeda dengan matriks fisik.Kromatografi cair tekanan tinggi (HPLC) umumnya digunakan untuk pemurnian peptida.Peptida atau peptida diterapkan dalam campuran pelarut yang berubah dari waktu ke waktu karena dipompa melintasi kolom manik -manik kecil pada tekanan tinggi.Peptida yang berbeda dielusi pada berbagai titik waktu dan terdeteksi oleh monitor, seringkali spektrofotometer UV.

Ketika melakukan penelitian pada peptida, seringkali substansi yang menarik jarang dan tidak dapat dibeli dari perusahaan kimia.Jika struktur peptida yang diinginkan diketahui, sering kali lebih mudah untuk disiapkan secara kimia dengan sintesis peptida daripada mengisolasi senyawa dari sumber alami.Isolasi produk alami sangat sulit.Peptida sintetis umumnya dimurnikan dengan HPLC.

Sintesis kimia semacam itu mungkin menakutkan bagi peneliti independen yang bukan ahli kimia.Seringkali, tugas ini dikontrak ke perusahaan sintesis peptida yang berspesialisasi dalam teknik ini.Ini mungkin lebih ekonomis daripada mencoba mengatur sistem dari awal di laboratorium.Perusahaan peptida dapat membuat peptida khusus disesuaikan dengan kebutuhan peneliti.

Alasan lain untuk pemurnian peptida dapat terjadi ketika seorang peneliti telah memurnikan protein dan berusaha menentukan identitasnya.Ia dapat menurunkan protein menjadi fragmen peptida, memisahkan fragmen dengan pemurnian, dan memiliki pola fragmentasi peptida yang terdeteksi oleh spektrometer massa saat mereka dielusi dari kolom.Teknik ini dikenal sebagai LC-MS, kependekan dari spektrometri massa kromatografi cair.Ini memberikan berat molekul dan komposisi asam amino dari fragmen, dan sering memungkinkan identifikasi protein, jika yang serupa atau identik telah diidentifikasi sebelumnya.

Banyak peneliti bekerja dengan peptida yang memiliki fitur baru, seperti asam amino yang tidak alami, untukCobalah dan temukan yang dengan aktivitas biologis yang tidak biasa.Ada seluruh bidang yang disebut peptidomimetik yang dikhususkan untuk studi peptida baru tersebut.Seringkali, urutan yang dihasilkan komputer dirancang, dan pustaka peptida disintesis yang mencakup berbagai peptida atipikal.Pemurnian peptida digunakan untuk memisahkan anggota individu perpustakaan ini untuk menyediakan peptida murni untuk menguji aktivitas biologis.Strategi ini telah berhasil dalam menghasilkan setidaknya satu obat baru yang tersedia secara komersial.

Banyak peptida yang aktif secara biologis yang menarik untuk penggunaan medis.Senyawa yang digunakan secara komersial, seperti insulin, umumnya diproduksi oleh sistem ekspresi DNA rekombinan yang menghasilkan sejumlah besar senyawa yang diinginkan.Seringkali, peptida direkayasa secara genetik untuk memfasilitasi pemurnian dengan memiliki semacam tag ditambahkan ke front mereka.Ini memungkinkan penggunaan kromatografi afinitas untuk memurnikan peptida.

Dengan jenis kromatografi ini, tag adalah senyawa, seperti histidin, yang akan mengikat matriks manik -manik, seperti nikel, yang dipilih karena kemampuannya mengikat tag.Protein dan peptida yang tidak diinginkan umumnya melewati kolom tanpa mengikat.Peptida yang dirancang khusus biasanya berikatan kuat ke kolom.Setelah protein dan peptida terkontaminasi dicuci, peptida yang diinginkan dielusi oleh senyawa yang bersaing untuk mengikat T ke Tdia matriks.Satu kemudian memiliki persiapan peptida yang diinginkan, dan tag dapat dihapus dengan belahan dada.