Ano ang paglilinis ng peptide?

Ang mga peptides ay maliit na polimer na binubuo ng mga amino acid.Marami ang biologically-aktibo bilang mga hormone, lason, o may iba pang mga kakayahan.Ang ganitong mga compound ay madalas na ginagamit sa biological, medikal, at kemikal na pananaliksik.Nagsisilbi rin sila bilang mga bloke ng gusali ng mga protina kapag ang mga bilang ng mga ito ay magkasama.Ang paglilinis ng peptide ay isang pamamaraan na ginamit upang linisin ang malaking dami ng isang nais na peptide, o upang matulungan ang hiwalay na mga peptides na nabuo mula sa pagtunaw ng mga protina.naiiba sa isang pisikal na matrix.Ang mataas na presyon ng likidong chromatography (HPLC) ay karaniwang ginagamit para sa paglilinis ng peptide.Ang peptide o peptides ay inilalapat sa isang halo ng mga solvent na nagbabago sa paglipas ng panahon habang sila ay pumped sa isang haligi ng maliit na kuwintas sa mataas na presyon.Ang iba't ibang mga peptides ay elute sa iba't ibang mga puntos ng oras at napansin ng isang monitor, madalas na isang UV spectrophotometer.

Kapag nagsasagawa ng pananaliksik sa mga peptides, madalas na ang sangkap ng interes ay bihirang at hindi mabibili mula sa mga kumpanya ng kemikal.Kung ang istraktura ng nais na peptide ay kilala, madalas na mas madaling maghanda ng chemically sa pamamagitan ng peptide synthesis kaysa ibukod ang tambalan mula sa mga likas na mapagkukunan.Ang mga likas na produkto ng paghihiwalay ay kilalang -kilala.Ang mga sintetikong peptides ay karaniwang nalinis ng HPLC.Kadalasan, ang gawaing ito ay kinontrata sa mga kumpanya ng peptide synthesis na dalubhasa sa mga pamamaraan na ito.Maaaring ito ay mas matipid kaysa sa pagsisikap na i -set up ang system mula sa simula sa isang laboratoryo.Ang mga kumpanya ng peptide ay maaaring gumawa ng mga pasadyang peptides na naaayon sa mga pangangailangan ng mananaliksik.Maaari niyang ibagsak ang protina sa mga fragment ng peptide, paghiwalayin ang mga fragment sa pamamagitan ng paglilinis, at magkaroon ng pattern ng fragmentation ng mga peptides na napansin ng isang mass spectrometer habang pinipigilan nila ang haligi.Ang pamamaraan na ito ay kilala bilang LC-MS, maikli para sa likidong chromatography-mass spectrometry.Nagbibigay ito ng molekular na timbang at komposisyon ng amino acid ng mga fragment, at madalas na nagbibigay -daan sa pagkakakilanlan ng mga protina, kung ang mga katulad o magkapareho ay nakilala dati.Subukan at hanapin ang mga may hindi pangkaraniwang biological na aktibidad.Mayroong isang buong patlang na tinatawag na peptidomimetics na nakatuon sa pag -aaral ng naturang mga peptides ng nobela.Kadalasan, ang mga pagkakasunud-sunod na nabuo ng computer ay dinisenyo, at ang isang library ng peptide ay synthesized na sumasaklaw sa isang hanay ng mga atypical peptides.Ang paglilinis ng peptide ay ginagamit upang paghiwalayin ang mga indibidwal na miyembro ng library na ito upang magbigay ng purong peptide upang subukan para sa biological na aktibidad.Ang diskarte na ito ay matagumpay sa pagbuo ng hindi bababa sa isang bagong gamot na magagamit sa komersyo.

Marami sa mga biologically-active peptides ay interesado para sa mga medikal na gamit.Ang mga compound na ginamit sa komersyo, tulad ng insulin, ay karaniwang ginawa ng mga recombinant na mga sistema ng overexpression ng DNA na bumubuo ng malaking halaga ng nais na tambalan.Kadalasan, ang mga peptides ay genetically engineered upang mapadali ang paglilinis sa pamamagitan ng pagkakaroon ng ilang uri ng tag na idinagdag sa kanilang mga harapan.Pinapayagan nito ang paggamit ng affinity chromatography upang linisin ang peptide.

Sa ganitong uri ng chromatography, ang tag ay isang tambalan, tulad ng histidine, na magbubuklod ng isang matrix ng kuwintas, tulad ng nikel, pinili para sa kakayahang magbigkis ng tag.Ang mga hindi kanais -nais na protina at peptides ay karaniwang dumadaan sa haligi nang hindi nagbubuklod.Ang partikular na dinisenyo peptide ay karaniwang nagbubuklod nang malakas sa haligi.Matapos hugasan ang mga kontaminadong protina at peptides, ang nais na peptide ay pinahiran ng isang tambalan na nakikipagkumpitensya para sa pagbubuklod sa tSiya matrix.Ang isa ay may isang medyo purong paghahanda ng nais na peptide, at ang tag ay maaaring alisin sa pamamagitan ng cleavage.