Mi az izoelektromos pont?

A fehérjék aminosavak láncaiból készülnek, amelyek mindegyike eltérő pH -értékekkel rendelkezik.A fehérje teljes pH -ja az egyes aminosavak pH -értékeinek keverékéből áll, mivel azok ionok képződnek abban az adott oldatban, amelyben oldódnak.A fehérje izoelektromos pontja (PI) az a pH, amelyen a fehérje nincs nettó töltése.Ez a tulajdonság kihasználható a fehérje elkülönítésére az ismert PI -vel a többi fehérjéktől heterogén keverékben.

Az aminosavak aminosavakkal rendelkeznek, amelyek alapvető, magas pH -val.Az aminosav másik vége a karboxilterminális, amely savas, alacsony pH -val.Különböző pH -értékeknél a fehérjék aminosavai töltéseikben változnak.Az izoelektromos pontjuk alatti fehérjék pozitív töltésük van.Ezzel szemben ezen a pont felettieknek negatív töltése van.

A fehérje tisztításának izoelektromos pontjának ismereteinek kiaknázásához a fehérjék keverékét elektromos mezőnek vetik alá.Ezt általában agaróz vagy poliakrilamid gélekben végzik, és izoelektromos fókuszálásnak nevezik.Egy régebbi technika az, hogy az eljárást nagyobb léptékben végezzük üvegoszlopban, szacharóz oldat felhasználásával, mindkét végén elektródákkal.Az amfolitoknak nevezett vegyületeket adunk hozzá, amelyek következetes pH -gradiens képződését okozják.Amikor a gélt vagy az oszlopot elektromos áramnak vetik alá, a fehérjék addig vándorolnak, amíg el nem érik az izoelektromos pontjukat, majd helyben maradnak. A gélek fehérjéit általában egy festék láthatóvá teszi, amely a fehérjéket köti.Időnként, ha enzimeket vizsgálnak, szubsztrátot lehet használni, amely színes reakciót eredményez.Általában olyan standardokat használnak, amelyekben ismert izoelektromos pontokkal rendelkező fehérjék vannak.A fehérje ezután tisztítható és szekvenálható.Miután a szekvenciát ismerték, felhasználható a polimeráz láncreakció (PCR) primerjeinek megtervezésére, és felhasználható a fehérje génének klónozására, ha megfelelő nukleinsav anyag áll rendelkezésre.Kapcsolódó fehérjék, hogy lássák, mennyire különböznek egymástól.Az egyik szövődmény lehet, hogy a fehérjékhez cukrok vannak kötve.Ezt glikozilációnak nevezzük, és befolyásolhatja a fehérje PI -jét.Úgy tűnik, hogy több fehérje létezik, különböző izoelektromos pontokkal, amikor valójában csak egy fehérje van, amelyet differenciálisan glikoziláltak.A standard módszerekkel, például a kromatográfiával tisztított fehérjéket időnként izoelektromos fókuszálással elemezzük, hogy tisztaságukat biztosítsák.