Ano ang isoelectric point?

Ang mga protina ay itinayo ng mga kadena ng mga amino acid, na ang bawat isa ay may iba't ibang mga halaga ng pH.Ang pangkalahatang pH ng protina ay binubuo ng halo ng mga halaga ng pH ng mga indibidwal na amino acid habang bumubuo sila ng mga ion sa partikular na solusyon kung saan sila ay natunaw.Ang isoelectric point (PI) ng isang protina ay ang pH kung saan ang protina na iyon ay walang singil.Ang pag -aari na ito ay maaaring samantalahin upang paghiwalayin ang protina na may kilalang PI mula sa iba pang mga protina sa isang heterogenous na halo.Ang iba pang dulo ng amino acid ay ang carboxyl terminal na acidic, na may mababang pH.Sa magkakaibang mga halaga ng pH, ang mga amino acid sa mga protina ay magkakaiba sa kanilang mga singil.Ang mga protina sa ibaba ng kanilang isoelectric point ay may positibong singil.Sa kaibahan, ang mga nasa itaas na puntong ito ay may negatibong singil.

Upang mapagsamantalahan ang kaalaman sa isoelectric point para sa paglilinis ng protina, ang isang halo ng mga protina ay sumailalim sa isang larangan ng kuryente.Ito ay karaniwang ginagawa sa agarose o polyacrylamide gels, at kilala bilang isoelectric na nakatuon.Ang isang mas matandang pamamaraan ay upang maisagawa ang pamamaraan sa isang mas malaking sukat sa isang haligi ng baso gamit ang isang solusyon ng sucrose na may mga electrodes sa bawat dulo.Ang mga compound na tinatawag na ampholyte ay idinagdag na sanhi ng pagbuo ng isang pare -pareho na gradient ng pH.Kapag ang gel o haligi ay sumailalim sa electric kasalukuyang, ang mga protina ay lumipat hanggang sa maabot nila ang kanilang isoelectric point, at pagkatapos ay mananatiling nakatigil.

Ang mga protina sa mga gels ay karaniwang nakikita ng isang pangulay na nagbubuklod ng mga protina.Minsan, kung pinag -aaralan ang mga enzyme, maaaring magamit ang isang substrate na nagbibigay ng isang kulay na reaksyon.Karaniwan ang mga pamantayan ay ginagamit na may mga protina ng kilalang mga puntos ng isoelectric.Ang protina ay maaaring malinis at sunud -sunod.Kapag kilala ang pagkakasunud -sunod, maaari itong magamit upang magdisenyo ng mga panimulang aklat para sa reaksyon ng chain ng polymerase (PCR) at ginamit upang mai -clone ang gene para sa protina kung ang angkop na materyal na nucleic acid ay magagamit.Mga kaugnay na protina upang makita kung gaano sila kaiba sa bawat isa.Ang isang komplikasyon ay maaaring ang mga protina ay maaaring magkaroon ng mga sugars na nakasalalay sa kanila.Ito ay tinatawag na glycosylation at maaaring makaapekto sa PI ng protina.Maaaring mukhang may maraming mga protina na may iba't ibang mga puntos ng isoelectric, kung sa katunayan mayroong isang protina lamang na naiiba ang glycosylated.Ang mga protina na nalinis ng mga karaniwang pamamaraan tulad ng chromatography ay minsan ay nasuri ng isoelectric na nakatuon upang matiyak ang kanilang kadalisayan.