Apa titik isoelektriknya?

Protein dibangun dari rantai asam amino, yang masing -masing memiliki nilai pH yang berbeda.PH keseluruhan protein terdiri dari campuran nilai pH asam amino individu karena mereka membentuk ion dalam larutan khusus di mana mereka dilarutkan.Titik isoelektrik (PI) dari protein adalah pH di mana protein tersebut tidak memiliki muatan bersih.Properti ini dapat dieksploitasi untuk memisahkan protein dengan PI yang diketahui dari protein lain dalam campuran heterogen.

Asam amino memiliki kelompok terminal amino yang dasar, memiliki pH tinggi.Ujung lain dari asam amino adalah terminal karboksil yang bersifat asam, dengan pH rendah.Pada nilai pH yang berbeda, asam amino pada protein akan bervariasi dalam muatannya.Protein di bawah titik isoelektriknya memiliki muatan positif.Sebaliknya, yang di atas titik ini memiliki muatan negatif.

Untuk mengeksploitasi pengetahuan tentang titik isoelektrik untuk pemurnian protein, campuran protein mengalami medan listrik.Ini umumnya dilakukan dalam gel agarosa atau poliakrilamida, dan dikenal sebagai fokus isoelektrik.Teknik yang lebih lama adalah melakukan prosedur pada skala yang lebih besar dalam kolom kaca menggunakan larutan sukrosa dengan elektroda di setiap ujungnya.Senyawa yang disebut amfolit ditambahkan yang menyebabkan pembentukan gradien pH yang konsisten.Ketika gel atau kolom mengalami arus listrik, protein bermigrasi sampai mereka mencapai titik isoelektriknya, dan kemudian tetap diam.

Protein pada gel umumnya dibuat terlihat oleh pewarna yang mengikat protein.Terkadang, jika enzim sedang dipelajari, substrat dapat digunakan yang memberikan reaksi berwarna.Biasanya standar digunakan yang memiliki protein dari titik isoelektrik yang diketahui.

Setelah orang tahu di mana protein yang diinginkan berada, teknik umum adalah memotong protein yang terisolasi dari gel.Protein kemudian dapat dimurnikan dan diurutkan.Setelah urutan diketahui, dapat digunakan untuk merancang primer untuk reaksi rantai polimerase (PCR) dan digunakan untuk mengkloning gen untuk protein jika bahan asam nukleat yang sesuai tersedia.

fokus isoelektrik juga merupakan cara umum untuk menganalisis dengan cermatProtein terkait untuk melihat betapa berbedanya mereka dari satu sama lain.Salah satu komplikasi dapat berupa protein dapat memiliki gula yang terikat padanya.Ini disebut glikosilasi dan dapat mempengaruhi PI protein.Ini mungkin terlihat seperti ada beberapa protein dengan titik isoelektrik yang berbeda, padahal sebenarnya hanya ada satu protein yang telah secara berbeda glikosilasi.Protein yang dimurnikan dengan metode standar seperti kromatografi kadang -kadang dianalisis dengan fokus isoelektrik untuk memastikan kemurniannya.