Apa itu perpustakaan gen?

Perpustakaan gen adalah istilah untuk koleksi fragmen asam deoksiribonukleat (DNA) yang telah dikloning secara acak dari genom organisme.Mereka dikloning sebagai plasmid yang dapat mereplikasi secara terpisah dari kromosom dan fag mereka, yang merupakan virus parasit yang memakan bakteri.Ketika diklon sebagai plasmid, pengumpulan adalah sel inang dan masing -masing sel mengandung fragmen DNA.Perpustakaan gen fag terdiri dari apa yang disebut fag lisat, yang merupakan residu sel yang hancur dengan fragmen DNA yang dimasukkan.Ketika perpustakaan gen berisi kumpulan semua informasi genetik tentang suatu organisme, mereka dianggap sebagai perpustakaan gen representasional.

Selain itu, perpustakaan dapat menggunakan asam nukleat rekombinan seluler (RNA) untuk bahan berlabuh, dan kumpulan sel inang ini dengan ini dengan iniVektor rekombinan dikenal sebagai perpustakaan gen cRNA.Skrining perpustakaan gen menemukan sel -sel tertentu yang mengandung vektor kloning dengan gen tertentu dicari di perpustakaan gen dan kemudian menggunakan salah satu dari banyak teknik mengisolasi dan memanennya.Setelah dipanen, sel -sel dianggap dikloning.Untuk memiliki peluang yang masuk akal untuk mengisolasi dan mengkloning gen tertentu, biasanya hanya perpustakaan gen representasional yang digunakan sebagai setiap gen dan setiap fragmen DNA asli dari genom tertentu dikumpulkan di dalamnya.Untuk mencapai kemungkinan 99% untuk menemukan gen manusia tertentu untuk kloning, lebih dari 600.000 sel kloning perlu disaring untuk menemukan gen yang diinginkan dari perpustakaan gen representasional..Perpustakaan disusun untuk mengatur DNA dan ribuan gen yang berbeda.Perpustakaan menjadi kumpulan puluhan ribu koloni bakteri, masing -masing dimodulasi dengan fragmen DNA dari organisme yang mengandung gen minat khusus.Perpustakaan juga berisi enzim restriksi dan plasmid.Enzim restriksi digunakan untuk membaca informasi nukleotida DNA dan digunakan untuk memotong DNA menjadi fragmen dengan memisahkan nukleotida satu sama lain.

Enzim restriksi yang sama memotong plasmid bakteri dan fragmen dan plasmid dikombinasikan dalam tabung reaksi untuk digabungkan, membuat kombinasi baru.Plasmid rekombinan ini kemudian dikembalikan ke kultur bakteri menggunakan kejutan panas atau elektroporasi.Langkah -langkah ini dilakukan berulang kali sampai seluruh perpustakaan gen telah dibentuk untuk organisme genom tertentu dari semua fragmen ekstraksi DNA asli.