ノーザンブロットとは何ですか？

ノーザンブロットハイブリダイゼーションは、サンプルのメッセンジャーRNA（mRNA）レベルを検出し、存在するmRNAの量を定量化するために使用される手法です。他のより強力な手法は存在しますが、ノーザンブロットはそのシンプルさと使いやすさのために依然として標準であり続けています。ノーザンブロッティング手法では、単一の実験で複数のサンプルを直接比較することもできます。

メッセンジャーRNAは、遺伝子が発現しているときに生成される核酸の一種です。細胞内でスイッチを入れて機能する遺伝子がmRNAに転写されます。次に、mRNAは細胞の細胞質に輸送され、そこでタンパク質に変換されます。したがって、細胞mRNAサンプルのノーザンブロット分析は、細胞が生成しているタンパク質の配列に関する有用な情報を提供できます。サイズに応じて分離する。既知のサイズのmRNA分子のサンプルは、コントロールを提供するために同時に実行されます。電気泳動が完了すると、サンプルは通常、ナイロンなどの材料から作られた固体膜に移動して固定されます。次に、分析の数時間前にサンプルを放射標識プローブに曝露します。分析中、放射標識プローブにハイブリダイズしたmRNAは、X線を使用して明確に検出できます。

ノーザンブロッティング技術により、異なる組織タイプ間の遺伝子発現パターンの観察が可能になります。さまざまな異なる組織や臓器型の細胞から抽出されたメッセンジャーRNAを比較することができ、ストレス、感染、および他の多くの刺激に対する細胞反応を調べることができます。さまざまな条件下でのmRNA発現の違いを見ることにより、科学者は特定の刺激に応じて細胞が生成するタンパク質の種類を決定できます。これは、未知のタンパク質の機能に関する手がかりを提供します。または、既知のタンパク質の場合、問題の刺激に対する細胞応答に関する情報が提供されます。たとえば、ノーザンブロットは、特定の毒素の存在に応じて未知のタンパク質の発現が増加することを示している場合があります。その後、おそらく化学物質を細胞から輸送するか、それを代謝物に変換することにより、タンパク質が毒性の低下に関与していると理論化される可能性があります。既知のタンパク質が検査中である場合、タンパク質発現の変化を文書化することで、反応自体に関する情報を提供できます。たとえば、既知の分子輸送体の発現が増加した場合、毒素に対する細胞の反応が細胞から毒素を輸送することであることが確認できます。