Πώς λειτουργεί η δοκιμή βακτηριακής ενδοτοξίνης;

Η δοκιμή βακτηριακής ενδοτοξίνης συνήθως περιλαμβάνει τη χρήση αντιδραστηρίων τα οποία, όταν αναμειγνύονται σε ένα διάλυμα με πιθανή μολυσματική, προκαλούν αντίδραση, υποδηλώνοντας την παρουσία ενδοτοξίνης.Οι χρωμογενείς δοκιμές, η δοκιμή θρόμβου πηκτής και οι θολιδομετρικές δοκιμές είναι οι επιστήμονες που χρησιμοποιούν συνήθως για τη δοκιμή βακτηριακών ενδοτοξίνης.Οι τεχνικοί χρησιμοποιούν αυτές τις μεθόδους αξιολόγησης σε μια ποικιλία ουσιών και αντικειμένων κατά τον έλεγχο της μόλυνσης ενδοτοξίνης.Το νερό, οι πρώτες ύλες που χρησιμοποιούνται για την κατασκευή φαρμάκων, εξοπλισμού και συσκευασίας πρέπει να περάσουν όλα τα πρότυπα ενδοτοξίνης.

Τα βακτήρια, οι μύκητες και οι ιοί έχουν όλες τις προστατευτικές εξωτερικές μεμβράνες που αποτελούνται από λιποπολυσακχαρίτες, που επίσης αναφέρονται ως LPS.Το τμήμα λιπιδίων αυτών των αλυσίδων περιέχει ενδοτοξίνες.Αυτές οι ουσίες παραμένουν γενικά εντός της μεμβράνης, αλλά απελευθερώνονται κατά τη διαδικασία της κυτταρικής διαίρεσης και κατά τη διάρκεια της κυτταρικής καταστροφής ή της λύσης.Στους ανθρώπους, αυτές οι ουσίες προκαλούν πυρετό, μη φυσιολογική πήξη, σηπτικό σοκ και άλλα συμπτώματα, αν και σε αντίθεση με τις εξωτοξίνες εντός του κυττάρου, οι ενδοτοξίνες δεν μετατρέπονται σε τοξοειδές.Γενικά, οι μικροβιολόγοι ελέγχουν την παρουσία ενδοτοξινών που σχετίζονται με διάφορα gram-αρνητικά βακτήρια, συμπεριλαμβανομένου του e.Coli .

Η δοκιμή θρόμβου πηκτώματος ή η δοκιμασία Limulus ameboecyte (LAL), περιλαμβάνει τη χρήση χημικών ενδοτοξινών που προέρχεται από τα αμοιβοκύτταρα του καβουριού Horseshoe, που αναφέρονται επίσης ως πολυφώματα Limulus.ή η πηκτωματοποίηση εμφανίζεται όταν το προϊόν λύσης εκτίθεται στο εν λόγω αντικείμενο ή ουσία.Οι μικροβιολόγοι χρησιμοποιούν συνήθως αυτή τη μέθοδο δοκιμής βακτηριακής ενδοτοξίνης σε συνδυασμό με χρωμογενείς και θολερομετρικές δοκιμές για οριστικά αποτελέσματα.Όταν αυτό το λύμα έρχεται σε επαφή με μια ενδοτοξίνη, η αντίδραση παράγει ένα συγκεκριμένο χρώμα.Η τελική διαδικασία δοκιμής περιλαμβάνει τη μέτρηση της θολερότητας ή της θολερότητας της λύσης.Οι τεχνικοί εκθέτουν το διάλυμα που σχηματίζεται στη δοκιμή θρόμβου πηκτής σε ένα φασματοφωτόμετρο, το οποίο εκπέμπει μια δέσμη φωτός.Με τη μέτρηση της απώλειας της έντασης του φωτός στη δέσμη καθώς διέρχεται από το διάλυμα, οι μικροβιολόγοι μπορούν να καθορίσουν εάν υπάρχει ή όχι ενδοτοξίνη. Οι συνεργάτες LAB γενικά ολοκληρώνουν αυτές τις τρεις δοκιμές ενδοτοξίνης βακτηρίων δύο ή τρεις φορές για να εξασφαλίσουν ακριβή αποτελέσματα.Η δοκιμή πηκτής δεν χρησιμοποιείται αποκλειστικά καθώς το χαμηλότερο όριο ανίχνευσης είναι 0,03 μονάδες Ehrlich ανά χιλιοστόλιτρο (ΕΕ/mL).Οι χρωμογενείς και οι θολιδομετρικές δοκιμές ανιχνεύουν ενδοτοξίνες στην περιοχή 0.005 ΕΕ/mL.Οι παράμετροι ασφαλείας διαφέρουν σε μεγάλο βαθμό ανάλογα με την δοκιμή ουσίας.Ενώ το αποστειρωμένο νερό που χρησιμοποιείται για σκοπούς έγχυσης ή άρδευσης δεν μπορεί να περιέχει υπερδιβολές από 0,25 ΕΕ/mL, αποστειρωμένο νερό για σκοπούς εισπνοής μπορεί να περιέχει έως και 0,5 ΕΕ/mL.