Τι είναι η ανίχνευση ELISA;

Μια ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) είναι μια δοκιμή που εκτελείται σε ένα εργαστήριο ανοσολογίας για τον προσδιορισμό των επιπέδων πρωτεΐνης σε ένα βιολογικό δείγμα.Η ανίχνευση ELISA αναφέρεται στο τελικό βήμα της δοκιμής στο οποίο προστίθεται ένα σαφές διάλυμα ή υπόστρωμα σε μια πλαστική πλάκα που περιέχει δεσμευμένο ενζυμικό αντίσωμα.Το ένζυμο διασπά το υπόστρωμα και συμβαίνει μια αλλαγή χρώματος.Η απορρόφηση φωτός του τελικού χρωματισμένου διαλύματος μετράται στη συνέχεια σε έναν αναγνώστη ή φασματοφωτόμετρο πλάκας ELISA. Υπάρχουν διάφοροι τύποι δοκιμών ELISA, με τους δύο πιο συνηθισμένους να είναι η έμμεση ELISA και η σύλληψη ή το σάντουιτς, ELISA.Η έμμεση ELISA χρησιμοποιείται για την ανίχνευση μιας πρωτεΐνης, γνωστή ως αντίσωμα, στον ορό ενός ασθενούς.Ένα παράδειγμα μιας έμμεσης δοκιμής ELISA είναι η δοκιμή του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας (HIV) που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων έναντι του HIV.Η δοκιμή ELISA σάντουιτς ανιχνεύει μια πρωτεΐνη ή αντιγόνο, καταγράφοντας το μεταξύ δύο αντισωμάτων.Η ανίχνευση της ορμονικής ανθρώπινης χοριακής γοναδοτροπίνης (HCG), η οποία είναι ανυψωμένη κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, γίνεται με δοκιμασία ELISA σάντουιτς.Αυτό το βήμα περιλαμβάνει την προσθήκη ενός αντισώματος που έχει ένα ενζυμικό μόριο που συνδέεται με αυτό.Μετά την προσθήκη του σημασμένου ενζύμου αντισώματος, προστίθεται ένα άχρωμο διάλυμα, που περιέχει το μόριο υποστρώματος ειδικό για αυτό το ένζυμο.Το ένζυμο διασπά το μόριο του υποστρώματος και το διάλυμα αλλάζει το χρώμα ανάλογα με τον συνδυασμό που χρησιμοποιείται.Ο προσδιορισμός της ποσότητας του αντισώματος ή του αντιγόνου στο δείγμα ασθενούς γίνεται με τη μέτρηση της έντασης της αλλαγής χρώματος

Υπάρχουν αρκετοί συνδυασμοί υποστρώματος ενζύμου που είναι διαθέσιμοι για χρήση στο βήμα ανίχνευσης ELISA.Το πιο συνηθισμένο ένζυμο είναι η υπεροξειδάση χρένου (HRP), η οποία μπορεί να διασπάσει μεταξύ άλλων τα μόρια του υποστρώματος.Η διάσπαση τόσο του OPD όσο και του TMB έχει ως αποτέλεσμα ένα κίτρινο χρώμα και η οπτική πυκνότητα ή η απορρόφηση του φωτός αυτών των υποστρωμάτων μετράται από έναν αναγνώστη πλάκας ELISA.Η απορρόφηση φωτός του OPD μετράται σε μήκος κύματος 490 νανομέτρων (NM) ενώ το TMB μετράται στα 450 nm

Ένα άλλο κοινό ένζυμο που χρησιμοποιείται στο βήμα ανίχνευσης ELISA είναι η αλκαλική φωσφατάση.Αυτό το ένζυμο χρησιμοποιείται με το υπόστρωμα Ρ-νιτροφαινυλ φωσφορικού (PNPP) και παράγει επίσης ένα κίτρινο διάλυμα.Το PNPP απορροφά το φως σε μήκος κύματος 405 nm

Η επιλογή των συνδυασμών ενζύμου υποστρώματος βασίζεται συνήθως σε ποια ένζυμο επισημασμένα αντισώματα είναι εμπορικά διαθέσιμα, καθώς και ποιος εξοπλισμός θα χρησιμοποιηθεί για τη μέτρηση της απορρόφησης του φωτός.Οι πολλοί διαθέσιμοι συνδυασμοί για την ανίχνευση ELISA καθιστούν την δοκιμασία ELISA εξαιρετικά ευέλικτη.Είναι ένα σημαντικό εργαλείο για τα εργαστήρια δοκιμών και ερευνητικών εργασιών.