Mi az ELISA detektálása?

Egy enzim összekapcsolt immunszorbens vizsgálat (ELISA) egy immunológiai laboratóriumban végzett teszt a biológiai mintában a fehérje szintjének meghatározására.Az ELISA detektálása a teszt utolsó lépésére utal, amelyben egy tiszta oldatot vagy szubsztrátot adnak egy kötött enzim-jelölt antitestet tartalmazó műanyag lemezhez.Az enzim hasítja a szubsztrátot, és a színváltozás bekövetkezik.A végső színes oldat fény abszorbanciáját ezután egy ELISA lemez leolvasóján vagy spektrofotométeren mérik.A közvetett ELISA -t egy antitest néven ismert fehérje kimutatására használják a beteg szérumában.A közvetett ELISA -teszt példája a humán immunhiány vírus (HIV) teszt, amelyet a HIV elleni antitestek kimutatására használtak.A szendvics ELISA -teszt fehérjét vagy antigént detektál két antitest között.A terhesség alatt emelt humoronos korion gonadotropin (HCG) hormon kimutatását szendvics ELISA teszttel végezzük.Ez a lépés magában foglalja egy antitest hozzáadását, amelyhez enzimmolekula van rögzítve.Az enzim-jelöléssel ellátott antitest hozzáadása után egy színtelen oldatot adunk, amely az enzimre specifikus szubsztrátmolekulát tartalmaz.Az enzim hasítja a szubsztrát molekulát, és az oldat az alkalmazott kombinációtól függően megváltoztatja a színt.Az antitest vagy antigén mennyiségének meghatározását a betegmintában a színváltozás intenzitásának mérésével végezzük.A leggyakoribb enzim a torma-peroxidáz (HRP), amely többek között a szubsztrát molekulák orto-fenilén-diamin-dihidrokloridot (OPD) és a tetrametil-benzidin (TMB) hasíthatja.Az OPD és a TMB hasítását sárga színű, és ezen szubsztrátok fényének optikai sűrűségét vagy abszorbanciáját ELISA lemezolvasóval mérik.Az OPD fény abszorbanciáját 490 nanométer (NM) hullámhosszon mérik, míg a TMB -t 450 nm -en mérik.Ezt az enzimet a P-nitrofenil-foszfát (PNPP) szubsztráttal használják, és sárga oldatot is előállítanak.A PNPP 405 nm hullámhosszon abszorbeálja a fényt.

Az enzimszubsztrát-kombinációk kiválasztása általában azon alapul, hogy az enzim által jelölt antitestek a kereskedelemben kaphatók, valamint azt, hogy milyen berendezéseket fognak használni a könnyű abszorbancia mérésére.Az ELISA detektálására rendelkezésre álló sok kombináció az ELISA tesztet nagyon sokoldalúvá teszi.Fontos eszköz a betegségtesztelésben és a kutatólaboratóriumokban.