การตรวจจับ ELISA คืออะไร?

เอนไซม์ที่เชื่อมโยงกับการทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ (ELISA) เป็นการทดสอบที่ดำเนินการในห้องปฏิบัติการภูมิคุ้มกันวิทยาเพื่อกำหนดระดับของโปรตีนในตัวอย่างชีวภาพการตรวจจับ ELISA หมายถึงขั้นตอนสุดท้ายของการทดสอบที่มีการแก้ปัญหาที่ชัดเจนหรือสารตั้งต้นจะถูกเพิ่มเข้าไปในแผ่นพลาสติกที่มีแอนติบอดีที่ติดฉลากเอนไซม์ที่ถูกผูกไว้เอนไซม์แยกสารตั้งต้นและการเปลี่ยนสีเกิดขึ้นการดูดกลืนแสงของสารละลายสีสุดท้ายจะถูกวัดบนเครื่องอ่านแผ่น ELISA หรือเครื่องวัดสเปกโตรโฟโตมิเตอร์

มีการทดสอบ ELISA หลายประเภทโดยที่พบมากที่สุดคือ ELISA ทางอ้อมและการจับหรือแซนวิช ELISAELISA ทางอ้อมใช้ในการตรวจจับโปรตีนหรือที่เรียกว่าแอนติบอดีในซีรั่มของผู้ป่วยตัวอย่างของการทดสอบ ELISA ทางอ้อมคือการทดสอบไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่องของมนุษย์ (HIV) ที่ใช้ในการตรวจจับแอนติบอดีต่อเอชไอวีการทดสอบ Sandwich ELISA ตรวจพบโปรตีนหรือแอนติเจนโดยการจับระหว่างแอนติบอดีสองตัวการตรวจหาฮอร์โมนมนุษย์ chorionic gonadotropin (HCG) ซึ่งสูงขึ้นในระหว่างตั้งครรภ์ทำด้วยการทดสอบแซนวิช ELISA

การทดสอบทั้งสองมีขั้นตอนการตรวจจับ ELISA ในตอนท้ายของการทดสอบขั้นตอนนี้เกี่ยวข้องกับการเพิ่มแอนติบอดีที่มีโมเลกุลเอนไซม์ติดอยู่หลังจากการเติมแอนติบอดีที่มีป้ายกำกับเอนไซม์แล้วสารละลายที่ไม่มีสีซึ่งมีโมเลกุลของสารตั้งต้นเฉพาะสำหรับเอนไซม์นั้นจะถูกเพิ่มเข้ามาเอนไซม์แยกโมเลกุลของพื้นผิวและสารละลายเปลี่ยนสีขึ้นอยู่กับการรวมกันที่ใช้การกำหนดปริมาณของแอนติบอดีหรือแอนติเจนในตัวอย่างผู้ป่วยทำได้โดยการวัดความเข้มของการเปลี่ยนสี

มีชุดค่าผสมของเอนไซม์หลายชนิดสำหรับใช้ในขั้นตอนการตรวจจับ ELISAเอนไซม์ที่พบมากที่สุดคือ horseradish peroxidase (HRP) ซึ่งสามารถแยกโมเลกุลของสารตั้งต้น Ortho-phenylenediamine dihydrochloride (OPD) และ tetramethylbenzidine (TMB)ความแตกแยกของ OPD และ TMB ส่งผลให้มีสีเหลืองและความหนาแน่นของแสงหรือการดูดกลืนแสงของแสงของพื้นผิวเหล่านี้วัดโดยเครื่องอ่านแผ่น ELISAการดูดซับแสงของ OPD วัดได้ที่ความยาวคลื่น 490 นาโนเมตร (nm) ในขณะที่ TMB วัดที่ 450 นาโนเมตร

เอนไซม์ทั่วไปอื่นที่ใช้ในขั้นตอนการตรวจจับ ELISA คืออัลคาไลน์ฟอสฟาเตสเอนไซม์นี้ใช้กับสารตั้งต้น P-nitrophenyl phosphate (PNPP) และยังผลิตสารละลายสีเหลืองPNPP ดูดซับแสงที่ความยาวคลื่น 405 นาโนเมตร

การเลือกของการรวมกันของสารตั้งต้นของเอนไซม์มักจะขึ้นอยู่กับสิ่งที่แอนติบอดีที่มีป้ายกำกับเอนไซม์มีวางจำหน่ายทั่วไปรวมถึงอุปกรณ์ใดที่จะใช้ในการวัดการดูดกลืนแสงชุดค่าผสมมากมายสำหรับการตรวจจับ ELISA ทำให้การทดสอบ ELISA มีความหลากหลายสูงเป็นเครื่องมือสำคัญในการทดสอบโรคและห้องปฏิบัติการวิจัย