Ano ang pagtuklas ng ELISA?

Ang isang enzyme na naka -link sa immunosorbent assay (ELISA) ay isang pagsubok na isinagawa sa isang immunology laboratory upang matukoy ang mga antas ng protina sa isang biological sample.Ang pagtuklas ng ELISA ay tumutukoy sa pangwakas na hakbang ng pagsubok kung saan ang isang malinaw na solusyon, o substrate, ay idinagdag sa isang plastic plate na naglalaman ng nakatali na antibody na may label na antibody.Ang enzyme ay nag -iikot sa substrate at nangyayari ang isang pagbabago ng kulay.Ang ilaw na pagsipsip ng pangwakas na kulay na solusyon ay pagkatapos ay sinusukat sa isang mambabasa ng ELISA plate o spectrophotometer.

Mayroong iba't ibang mga uri ng mga pagsubok sa ELISA, kasama ang dalawang pinaka -karaniwang pagiging hindi tuwirang ELISA at ang pagkuha, o sandwich, ELISA.Ang hindi tuwirang ELISA ay ginagamit upang makita ang isang protina, na kilala bilang isang antibody, sa suwero ng isang pasyente.Ang isang halimbawa ng isang hindi tuwirang pagsubok sa ELISA ay ang pagsubok ng immunodeficiency virus (HIV) na ginamit upang makita ang mga antibodies laban sa HIV.Ang pagsubok sa sandwich ELISA ay nakakakita ng isang protina, o antigen, sa pamamagitan ng pagkuha nito sa pagitan ng dalawang antibodies.Ang pagtuklas ng hormone na chorionic gonadotropin (HCG), na nakataas sa panahon ng pagbubuntis, ay ginagawa gamit ang isang pagsubok sa sandwich ELISA.Ang hakbang na ito ay nagsasangkot ng pagdaragdag ng isang antibody na may isang molekula ng enzyme na nakakabit dito.Matapos ang pagdaragdag ng antibody na may label na enzyme, isang walang kulay na solusyon, na naglalaman ng tiyak na molekula ng substrate para sa enzyme na iyon, ay idinagdag.Ang enzyme ay tinatanggal ang molekula ng substrate at ang solusyon ay nagbabago ng kulay depende sa kumbinasyon na ginamit.Ang pagpapasiya ng dami ng antibody o antigen sa sample ng pasyente ay ginagawa sa pamamagitan ng pagsukat ng intensity ng pagbabago ng kulay.

Mayroong maraming mga kumbinasyon ng enzyme substrate na magagamit para magamit sa hakbang ng pagtuklas ng ELISA.Ang pinakakaraniwang enzyme ay ang malunggay peroxidase (HRP), na maaaring mai-clear ang mga molekula ng substrate ortho-phenylenediamine dihydrochloride (OPD) at tetramethylbenzidine (TMB), bukod sa iba pa.Ang pag -cleavage ng parehong OPD at TMB ay nagreresulta sa isang dilaw na kulay, at ang optical density o pagsipsip ng ilaw ng mga substrate na ito ay sinusukat ng isang mambabasa ng ELISA plate.Ang ilaw na pagsipsip ng OPD ay sinusukat sa isang haba ng haba ng 490 nanometer (NM) habang ang TMB ay sinusukat sa 450 nm.

Ang isa pang karaniwang enzyme na ginamit sa hakbang ng pagtuklas ng ELISA ay alkalina na phosphatase.Ang enzyme na ito ay ginagamit gamit ang substrate p-nitrophenyl phosphate (PNPP), at gumagawa din ng isang dilaw na solusyon.Ang PNPP ay sumisipsip ng ilaw sa isang haba ng haba ng 405 nm.Ang maraming mga kumbinasyon na magagamit para sa pagtuklas ng ELISA ay gumawa ng pagsubok sa ELISA na lubos na maraming nalalaman.Ito ay isang mahalagang tool sa pagsubok sa sakit at mga laboratoryo ng pananaliksik.