Phát hiện ELISA là gì?

Một xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) là một xét nghiệm được thực hiện trong phòng thí nghiệm miễn dịch học để xác định mức độ protein trong mẫu sinh học.Phát hiện ELISA đề cập đến bước cuối cùng của thử nghiệm trong đó một dung dịch rõ ràng, hoặc chất nền, được thêm vào một tấm nhựa chứa kháng thể được dán nhãn enzyme liên kết.Enzyme cắt chất nền và thay đổi màu xảy ra.Độ hấp thụ ánh sáng của dung dịch màu cuối cùng sau đó được đo trên đầu đọc tấm ELISA hoặc máy quang phổ. Có nhiều loại thử nghiệm ELISA khác nhau, với hai loại phổ biến nhất là ELISA gián tiếp và chụp, hoặc sandwich, ELISA.ELISA gián tiếp được sử dụng để phát hiện protein, được gọi là kháng thể, trong huyết thanh bệnh nhân.Một ví dụ về xét nghiệm ELISA gián tiếp là xét nghiệm virus gây suy giảm miễn dịch ở người (HIV) được sử dụng để phát hiện các kháng thể chống lại HIV.Xét nghiệm ELISA sandwich phát hiện protein, hoặc kháng nguyên, bằng cách thu thập nó giữa hai kháng thể.Phát hiện hormone gonadotropin choorionic (HCG), được nâng lên trong khi mang thai, được thực hiện với xét nghiệm ELISA sandwich. Cả hai xét nghiệm đều có bước phát hiện ELISA khi kết thúc xét nghiệm.Bước này liên quan đến việc bổ sung một kháng thể có phân tử enzyme gắn liền với nó.Sau khi bổ sung kháng thể có nhãn enzyme, một dung dịch không màu, chứa phân tử cơ chất đặc hiệu cho enzyme đó, được thêm vào.Enzyme cắt phân tử cơ chất và dung dịch thay đổi màu tùy thuộc vào sự kết hợp được sử dụng.Xác định lượng kháng thể hoặc kháng nguyên trong mẫu bệnh nhân được thực hiện bằng cách đo cường độ thay đổi màu. Có một số kết hợp chất nền enzyme có sẵn để sử dụng trong bước phát hiện ELISA.Enzyme phổ biến nhất là cải ngựa peroxidase (HRP), có thể phân tách các phân tử cơ chất ortho-phenylenediamine dihydrochloride (OPD) và tetramethylbenzidine (TMB), trong số những người khác.Sự phân tách của cả OPD và TMB dẫn đến màu vàng và mật độ quang học hoặc độ hấp thụ của ánh sáng của các chất nền này được đo bằng đầu đọc tấm ELISA.Độ hấp thụ ánh sáng của OPD được đo ở bước sóng 490 nanomet (nm) trong khi TMB được đo ở 450nm. Một enzyme phổ biến khác được sử dụng trong bước phát hiện ELISA là phosphatase kiềm.Enzyme này được sử dụng với chất nền p-nitrophenyl phosphate (PNPP), và cũng tạo ra một dung dịch màu vàng.PNPP hấp thụ ánh sáng ở bước sóng 405nm. Lựa chọn các kết hợp chất nền enzyme thường dựa trên những kháng thể có nhãn enzyme có sẵn trên thị trường, cũng như những thiết bị sẽ được sử dụng để đo độ hấp thụ ánh sáng.Nhiều kết hợp có sẵn để phát hiện ELISA làm cho bài kiểm tra ELISA rất linh hoạt.Nó là một công cụ quan trọng trong các phòng thí nghiệm thử nghiệm và nghiên cứu bệnh.