Apa itu Deteksi ELISA?

Uji imunosorben terkait enzim (ELISA) adalah tes yang dilakukan di laboratorium imunologi untuk menentukan tingkat protein dalam sampel biologis.Deteksi ELISA mengacu pada langkah terakhir dari tes di mana solusi yang jelas, atau substrat, ditambahkan ke plat plastik yang mengandung antibodi berlabel enzim terikat.Enzim memecah substrat dan perubahan warna terjadi.Absorbansi cahaya dari larutan berwarna akhir kemudian diukur pada pembaca pelat ELISA atau spektrofotometer.

Ada berbagai jenis tes ELISA, dengan dua yang paling umum adalah ELISA tidak langsung dan penangkapan, atau sandwich, ELISA.ELISA tidak langsung digunakan untuk mendeteksi protein, yang dikenal sebagai antibodi, dalam serum pasien.Contoh tes ELISA tidak langsung adalah tes virus imunodefisiensi manusia (HIV) yang digunakan untuk mendeteksi antibodi terhadap HIV.Tes sandwich ELISA mendeteksi protein, atau antigen, dengan menangkapnya di antara dua antibodi.Deteksi hormon manusia korionik gonadotropin (HCG), yang meningkat selama kehamilan, dilakukan dengan tes sandwich ELISA.

kedua tes memiliki langkah deteksi ELISA pada akhir pengujian.Langkah ini melibatkan penambahan antibodi yang memiliki molekul enzim yang melekat padanya.Setelah penambahan antibodi berlabel enzim, larutan tidak berwarna, yang mengandung molekul substrat khusus untuk enzim itu, ditambahkan.Enzim memecah molekul substrat dan larutan berubah warna tergantung pada kombinasi yang digunakan.Penentuan jumlah antibodi atau antigen dalam sampel pasien dilakukan dengan mengukur intensitas perubahan warna.

Ada beberapa kombinasi substrat enzim yang tersedia untuk digunakan dalam langkah deteksi ELISA.Enzim yang paling umum adalah horseradish peroxidase (HRP), yang dapat memecah molekul substrat ortho-phenylenediamine dihydrochloride (OPD) dan tetramethylbenzidine (TMB), antara lain.Pembelahan OPD dan TMB menghasilkan warna kuning, dan kepadatan optik atau absorbansi cahaya dari substrat ini diukur oleh pembaca pelat ELISA.Absorbansi cahaya OPD diukur pada panjang gelombang 490 nanometer (NM) sementara TMB diukur pada 450 nm.

Enzim umum lain yang digunakan dalam langkah deteksi ELISA adalah alkali fosfatase.Enzim ini digunakan dengan substrat p-nitrophenyl fosfat (PNPP), dan juga menghasilkan larutan kuning.PNPP menyerap cahaya pada panjang gelombang 405 nm.

Pemilihan kombinasi substrat enzim biasanya didasarkan pada antibodi berlabel enzim apa yang tersedia secara komersial, serta peralatan apa yang akan digunakan untuk mengukur absorbansi cahaya.Banyak kombinasi yang tersedia untuk deteksi ELISA membuat uji ELISA menjadi sangat fleksibel.Ini adalah alat penting dalam pengujian penyakit dan laboratorium penelitian.