Ano ang iba't ibang mga pamamaraan ng pagpapasiya ng konsentrasyon ng protina?

Mayroong daan -daang iba't ibang mga pamamaraan ng pagpapasiya ng konsentrasyon ng protina.Ang hindi kapani -paniwalang pagkakaiba -iba sa mga uri ng mga solusyon sa protina na pinag -aaralan ng mga biochemist kung bakit walang isang unibersal na pamamaraan na gumagana para sa bawat uri ng solusyon sa protina.Ang pinaka -karaniwang protina assays ay ang Bradford assay, ang Lowry assay at ang bicinchoninic acid assay.Gayunpaman, ang maraming mga pagkakaiba -iba ay binuo kung kinakailangan upang gumana sa paligid ng anumang mga potensyal na hindi pagkakatugma sa kemikal sa pagitan ng solusyon ng protina at ang mga reagents na ginagamit sa assay.

Sa pangkalahatan ay nagsasalita, mayroong dalawang pangunahing kategorya ng mga assays para sa pagpapasiya ng konsentrasyon ng protina.Sa unang pangkat ng mga pamamaraan, ang isang makulay o fluorescent dye ay idinagdag sa isang solusyon sa protina, at partikular na nagbubuklod ito sa protina.Ang nakatali na pangulay ay may natatanging haba ng pagsipsip na proporsyonal sa dami ng protina.Sa pamamagitan ng paggamit ng isang spectrometer, posible na matantya ang konsentrasyon ng protina.

Ang pangalawang pangkat ng mga assays ay nagsasangkot ng pagdaragdag ng mga tanso (II) na mga ions sa isang solusyon ng protina, kung saan ang mga ions na ito ay nabawasan sa mga ions (i) ion.Ang mga nabawasan na mga ion ay pagkatapos ay maaaring makabuo ng mga makukulay na kumplikado sa pamamagitan ng pagbubuklod sa mga protina.Sa pamamagitan ng pagsukat ng mga pagsipsip sa kanilang natatanging mga haba ng haba, ang mga konsentrasyon ng protina ay maaaring ibukod din.Sa assay na ito, ang isang pulang pangulay na tinatawag na Coomassie Brilliant Blue ay idinagdag sa isang solusyon sa protina sa ilalim ng mga kondisyon ng acidic.Habang ang pangulay na ito ay nagbubuklod sa protina, bumubuo ito ng isang permanenteng asul na kumplikado na may isang katangian na pagsipsip sa 595 nanometer.Sa partikular, ang Bradford assay ay nagambala sa pamamagitan ng pagkakaroon ng sodium dodecyl sulfate (SDS), isang naglilinis na karaniwang ginagamit upang linisin ang mga protina at masira ang mga cell sa pamamagitan ng lysis.Ang naglilinis na ito ay nakakasagabal sa pagbubuklod ng pangulay sa mga protina, na nagreresulta sa isang hindi maaasahan at hindi tumpak na pagbabasa ng pagsipsip.Ang iba pang mga uri ng mga pamamaraan, kung gayon, ay dapat gamitin kapag naroroon ang SDS.

Ang isa pang serye ng mga assays ng protina ay binuo, at lahat sila ay nagsasangkot ng pagkakaiba -iba ng pagsubok sa biuret.Sa reaksyon na ito, ang isang protina ay pinagsama sa isang may tubig na base at tanso (II) ion.Ang mga ion na ito ay nabawasan at pagkatapos ay chelated ng protina upang makabuo ng mga makukulay na kumplikado.Dalawang sinisiguro na ang paggamit ng pagsubok na ito ay ang Lowry assay at ang bicinchoninic acid assay.Ang folin-ciocalteu reagent ay nag-oxidize ng mga aromatic residues, lalo na ang tryptophan, at tumutulong sa kumplikadong pagsipsip nang malakas sa 750 nanometer.Ang bicinchoninic acid assay, sa kabilang banda, ay nagsasangkot ng pagdaragdag ng bicinchoninic acid sa biuret test.Pagkatapos ng isang maikling pagpapapisa ng itlog sa halos 104 deg;Fahrenheit (40 deg; Celsius), dalawang katumbas ng acid at ang peptide bond ng protina chelate isang solong tanso (I) ion.Ang resulta ay isang kumplikadong sumisipsip nang malakas sa 562 nanometer.Ang pagkakaroon ng ilang mga chain ng amino acid side, disulfide bond at cofactors ay maaaring gumawa ng pagpapasiya ng konsentrasyon ng protina na ligaw na hindi tumpak.Madalas na kinakailangan para isaalang -alang ang isa hindi lamang ang mga protina kundi pati na rin ang iba pang mga reagents at buffer, tulad ng pagbabawas ng mga ahente at detergents.Ang mainam na pamamaraan ay magiging tugma sa kemikal pati na rin maging maaasahan, mura at simple upang mai -set up.