Hogyan határozzák meg a foszforilációs szintet?

A szerves molekulák vagy anyagok foszforilációs szintjét két módszer határozza meg: Western -blot és tömegspektrometria.A foszforiláció leggyakrabban a foszfát fehérjéhez való kötődésére utal.Amikor a foszfátok a protiénekhez kapcsolódnak, akkor az emberi testben a fehérje -enzimek természetes folyamata és funkciói zavartak.A foszforilációs szint meghatározása elengedhetetlen a betegségek széles skálájának kezeléséhez, a ráktól a cukorbetegségig.

A Western bloting egy népszerű módszer egy adott fehérjekészlet foszforilációs szintjének meghatározására.Az antitesteket, például az anti-foszfo-tirozin-monoklonális antitesteket, általában azért használják, mert könnyen kötődnek a protein tirozin-maradékaihoz, amelyeket a foszforiláció befolyásol.A Western -blotban a fehérjéket először méret szerint választják el egy gélelektroforézis néven ismert elektromos töltési módszerrel.Miután a fehérjék áthelyezése után az antitestek ragaszkodnak a kapcsolódó foszfáttal rendelkező fehérjékhez.A foszforilációs szintet ezután a membrán röntgenfelvételével lehet meghatározni.Bármely érintett fehérjék a fényvillanást bocsátják ki, megkönnyítve a kutató számára a foszforilációs szintek mérését.

A tömegspektrometria egy másik módszer az anyag foszforilációs szintjének mérésére.Ez a folyamat a fehérjemolekulákat ionokká alakítja, ami megkönnyíti azok nyomon követését és mérését.A mintát egy nagy teljesítményű ionforrás ionizálja, amely elárasztja a mintát elektronokkal.Ez a művelet a mintát kationokká, pozitív töltésű ionokká alakítja.

A tömegspektrométer tömeges elemzője elválasztja az ionokat tömegük és töltési intenzitásuk alapján.Ez lehetővé teszi a kutató számára, hogy felfedezze a tömeg-töltési arányt, ami kritikus jelentőségű a minta foszforilációs szintjének felfedezésében.Végül, az detektor az ionokat úgy méri, hogy az adatok diagram formájában jelenjenek meg.A diagram az x tengelyen lévő ionok tömeg / töltési arányát és az ionok relatív intenzitását mutatja az y tengelyen.

A foszforilációs szintek szintén mérhetők a szubsztrát foszforilációja során.A szubsztrát -foszforiláció egy olyan folyamat, amely adenozin -trifoszfátot (ATP) hoz létre, amely a sejtek közötti energiaátvitel szempontjából kritikus molekula a glikolízis során.Ez a folyamat mind az állati, mind a növényi sejtekben zajlik.Ez az energia ösztönzi a növény kloroplasztjain, a növényfotoszintézis helyén.A foszforiláció szintje korrelál a további ATP -molekulák létrehozásához szükséges foszfát mennyiségével.