Paano tinutukoy ang antas ng phosphorylation?

Ang antas ng phosphorylation ng mga organikong molekula o sangkap ay natutukoy ng dalawang pamamaraan: Western blotting at mass spectrometry.Ang Phosphorylation ay madalas na tumutukoy sa pag -attach ng isang pospeyt sa protina.Kapag ang mga pospeyt ay nakakabit sa mga protiens, ang mga natural na proseso at pag -andar ng mga enzyme ng protina sa loob ng katawan ng tao ay nabalisa.Ang pagtukoy ng antas ng phosphorylation ay mahalaga sa pagpapagamot ng isang malawak na hanay ng mga sakit, mula sa kanser hanggang sa diyabetis.Ang mga antibiotes tulad ng anti-phospho-tyrosine monoclonal antibodies ay karaniwang ginagamit dahil madali silang nagbubuklod sa isang nalalabi na protina tyrosine, na apektado ng phosphorylation.Sa Western blotting, ang mga protina ay unang pinaghiwalay ng laki gamit ang isang elektrikal na pamamaraan ng singil na kilala bilang gel electrophoresis.Kapag inilipat ang mga protina, ang mga antibodies ay mananatili sa anumang mga protina na may nakalakip na pospeyt.Ang antas ng phosphorylation ay maaaring matukoy ng isang x-ray ng lamad.Ang anumang mga apektadong protina ay magbibigay ng isang ilaw ng ilaw, na ginagawang mas madali para sa mananaliksik upang masukat ang mga antas ng phosphorylation.

Ang mass spectrometry ay isa pang paraan upang masukat ang antas ng phosphorylation ng isang sangkap.Ang prosesong ito ay nagko -convert ng mga molekula ng protina sa mga ion, na ginagawang mas madali silang subaybayan at masukat.Ang sample ay na-ionize ng isang mataas na lakas na mapagkukunan ng ion na pumapasok sa sample na may mga electron.Ang pagkilos na ito ay lumiliko ang sample sa mga cations, positibong sisingilin ng mga ion.

Ang mass analyzer ng mass spectrometer ay naghihiwalay sa mga ions sa pamamagitan ng kanilang masa at kasidhian ng singil.Pinapayagan nito ang mananaliksik na matuklasan ang ratio ng mass-to-charge, na kritikal sa pagtuklas ng antas ng phosphorylation ng sample.Sa wakas, sinusukat ng detektor ang mga ion upang maipakita ang data sa form ng tsart.Ipinapakita ng tsart ang ratio ng mass-to-charge ng mga ion sa x-axis, at ang kamag-anak na intensity ng mga ion sa y-axis.

Ang mga antas ng phosphorylation ay maaari ring masukat sa panahon ng substrate phosphorylation.Ang substrate phosphorylation ay isang proseso na lumilikha ng adenosine triphosphate (ATP), isang molekula na kritikal sa paglipat ng enerhiya sa mga cell, sa panahon ng glycolysis.Ang prosesong ito ay nangyayari sa parehong mga cell ng hayop at mga cell ng halaman.

Sa mga cell ng halaman, ang mga molekula ng ATP ay nilikha sa pamamagitan ng paggamit ng enerhiya mula sa araw.Ang enerhiya na ito ay sumisibol sa phosphorylation sa mga halaman ng chloroplast, ang site ng potosintesis ng halaman.Ang antas ng phosphorylation ay nakakaugnay sa dami ng pospeyt na kinakailangan upang lumikha ng mga karagdagang molekula ng ATP.