Mức độ phosphoryl hóa được xác định như thế nào?

Mức độ phosphoryl hóa của các phân tử hữu cơ hoặc các chất được xác định bằng hai phương pháp: phương pháp làm mờ phương Tây và quang phổ khối.Phosphorylation thường đề cập đến sự gắn kết của phốt phát với protein.Khi phốt phát gắn vào protiens, các quá trình và chức năng tự nhiên của các enzyme protein trong cơ thể con người bị xáo trộn.Xác định mức độ phosphoryl hóa là rất quan trọng để điều trị một loạt các bệnh, từ ung thư đến bệnh tiểu đường.

Western làm mờ là một phương pháp phổ biến được sử dụng để xác định mức độ phosphoryl hóa của một tập hợp protein cụ thể.Các kháng thể như kháng thể đơn dòng kháng phospho-tyrosine thường được sử dụng vì chúng dễ dàng liên kết với dư lượng protein tyrosine, bị ảnh hưởng bởi quá trình phosphoryl hóa.Ở phương Tây làm mờ, các protein đầu tiên được phân tách bằng kích thước bằng phương pháp điện tích được gọi là điện di gel. Các protein sau đó được chuyển vào một màng được bao phủ bởi các kháng thể đặc biệt liên kết với phốt phát trên protein.Khi các protein được chuyển, các kháng thể sẽ dính vào bất kỳ protein nào có phốt phát đính kèm.Mức độ phosphoryl hóa sau đó có thể được xác định bằng tia X của màng.Bất kỳ protein bị ảnh hưởng nào sẽ tạo ra một tia sáng, giúp nhà nghiên cứu dễ dàng đo mức độ phosphoryl hóa dễ dàng hơn.Phổ khối là một cách khác để đo mức độ phosphoryl hóa của một chất.Quá trình này chuyển đổi các phân tử protein thành các ion, giúp chúng dễ theo dõi và đo lường hơn.Mẫu được ion hóa bởi một nguồn ion công suất cao làm ngập mẫu bằng các electron.Hành động này biến mẫu thành cation, các ion tích điện dương.Máy phân tích khối lượng của máy quang phổ khối ngăn cách các ion bằng khối lượng và cường độ điện tích của chúng.Điều này cho phép nhà nghiên cứu khám phá tỷ lệ khối lượng-phụ trách, điều này rất quan trọng trong việc khám phá mức độ phosphoryl hóa của mẫu.Cuối cùng, máy dò đo các ion để dữ liệu có thể được hiển thị ở dạng biểu đồ.Biểu đồ cho thấy tỷ lệ khối lượng-phụ trách của các ion trên trục x và cường độ tương đối của các ion trên trục y.Mức độ phosphoryl hóa cũng có thể được đo trong quá trình phosphoryl hóa chất nền.Phosphoryl hóa cơ chất là một quá trình tạo ra adenosine triphosphate (ATP), một phân tử quan trọng để truyền năng lượng giữa các tế bào, trong quá trình glycolysis.Quá trình này xảy ra trong cả tế bào động vật và tế bào thực vật. Trong các tế bào thực vật, các phân tử ATP được tạo ra bằng cách sử dụng năng lượng từ mặt trời.Năng lượng này thúc đẩy quá trình phosphoryl hóa trong lục lạp thực vật, vị trí của quá trình quang hợp thực vật.Mức độ phosphoryl hóa tương quan với lượng phosphate cần thiết để tạo ra các phân tử ATP bổ sung.