Τι είναι το βόρειο κηλίδωμα;

Η υβριδοποίηση στυπώματος Northern είναι μια τεχνική που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση των επιπέδων Messenger RNA (mRNA) σε ένα δείγμα και για την ποσοτικοποίηση της ποσότητας mRNA που υπάρχει.Παρόλο που υπάρχουν άλλες ισχυρότερες τεχνικές, το Northern Blot παραμένει το πρότυπο λόγω της απλότητας και της ευκολίας χρήσης του.Η τεχνική του Northern Blotting επιτρέπει επίσης την άμεση σύγκριση πολλαπλών δειγμάτων σε ένα μόνο πείραμα.

Το RNA Messenger είναι ένας τύπος νουκλεϊκού οξέος που παράγεται όταν εκφράζεται ένα γονίδιο.Ένα γονίδιο που είναι ενεργοποιημένο και λειτουργικό μέσα σε ένα κύτταρο μεταγράφεται σε mRNA.Το mRNA στη συνέχεια μεταφέρεται στο κυτταρόπλασμα του κυττάρου, όπου μεταφράζεται σε πρωτεΐνη.Η ανάλυση στυπώματος βόρειου κύλινδρου ενός κυτταρικού δείγματος mRNA μπορεί συνεπώς να παρέχει χρήσιμες πληροφορίες σχετικά με τη σειρά πρωτεϊνών που παράγει το κύτταρο.

σε ένα βόρειο κηλίδωμα, το mRNA εκχυλίζεται από κύτταρα και διέρχεται από ηλεκτροφόρηση πηκτής αγαρόζης μετουσιόννα χωριστεί ανάλογα με το μέγεθος.Δείγματα μορίων mRNA των γνωστών μεγεθών εκτελούνται ταυτόχρονα για να παρέχουν έλεγχο.Μόλις ολοκληρωθεί η ηλεκτροφόρηση, τα δείγματα μεταφέρονται και ακινητοποιούνται σε μια συμπαγή μεμβράνη, συνήθως κατασκευασμένα από υλικό όπως το νάιλον.Τα δείγματα στη συνέχεια εκτίθενται σε ραδιοεπισημασμένους ανιχνευτές για αρκετές ώρες πριν από την ανάλυση.Κατά τη διάρκεια της ανάλυσης, το mRNA που έχει υβριδοποιηθεί σε ραδιοεπισημασμένο ανιχνευτή μπορεί να ανιχνευθεί με σαφήνεια χρησιμοποιώντας ακτίνες Χ.

Η τεχνική κηλίδωσης Northern επιτρέπει την παρατήρηση των γονιδιακών μορφών έκφρασης μεταξύ διαφορετικών τύπων ιστών.Το RNA Messenger που εξάγεται από κύτταρα διαφόρων διαφορετικών ιστών και τύπων οργάνων μπορεί να συγκριθεί και μπορούν να εξεταστούν κυτταρικές αποκρίσεις στο στρες, τη μόλυνση και πολλά άλλα ερεθίσματα.Με την εξέταση των διαφορών στην έκφραση mRNA υπό διαφορετικές συνθήκες, ένας επιστήμονας μπορεί να καθορίσει ποιους τύπους πρωτεϊνών που παράγει ένα κύτταρο σε απόκριση σε ορισμένα ερεθίσματα.Αυτό μπορεί να παρέχει ενδείξεις σχετικά με τις λειτουργίες των άγνωστων πρωτεϊνών ή στην περίπτωση γνωστών πρωτεϊνών, πληροφορίες σχετικά με κυτταρικές αποκρίσεις στα εν λόγω ερεθίσματα.

Για παράδειγμα, ένα στύπωμα Northern μπορεί να δείξει ότι η έκφραση μιας άγνωστης πρωτεΐνης αυξάνεται σε απόκριση στην παρουσία μιας συγκεκριμένης τοξίνης.Θα μπορούσε στη συνέχεια να θεωρηθεί ότι η πρωτεΐνη εμπλέκεται στη μείωση της τοξικότητας, ίσως με τη μεταφορά της χημικής ουσίας από το κύτταρο ή τη μετατροπή της σε μεταβολίτη.Εάν οι γνωστές πρωτεΐνες εξετάζονται, η τεκμηρίωση των αλλαγών στην έκφραση πρωτεϊνών μπορεί να παρέχει πληροφορίες σχετικά με την ίδια την απόκριση.Εάν η έκφραση ενός γνωστού μοριακού μεταφορέα αυξήθηκε, για παράδειγμα, θα μπορούσε να επιβεβαιωθεί ότι η κυτταρική απόκριση στην τοξίνη είναι η μεταφορά της τοξίνης από το κύτταρο.