Apa itu Northern Blot?

Hibridisasi Northern Blot adalah teknik yang digunakan untuk mendeteksi level RNA messenger (mRNA) dalam sampel, dan untuk mengukur jumlah mRNA yang ada.Meskipun teknik lain yang lebih kuat memang ada, Northern Blot tetap menjadi standar karena kesederhanaan dan kemudahan penggunaannya.Teknik blotting utara juga memungkinkan perbandingan langsung dari beberapa sampel dalam satu percobaan.

Messenger RNA adalah jenis asam nukleat yang diproduksi ketika gen diekspresikan.Gen yang dinyalakan dan fungsional dalam sel ditranskripsi ke mRNA.MRNA kemudian diangkut ke dalam sitoplasma sel, di mana ia diterjemahkan ke dalam protein.Analisis Northern Blot dari sampel mRNA seluler dapat memberikan informasi yang berguna tentang array protein yang diproduksi sel.

Dalam blot utara, mRNA diekstraksi dari sel dan dijalankan melalui elektroforesis gel agarosa yang mendenaturasi, yang memungkinkan mRNA dalam sampeluntuk dipisahkan menurut ukuran.Sampel molekul mRNA dengan ukuran yang diketahui dijalankan pada saat yang sama untuk memberikan kontrol.Setelah elektroforesis selesai, sampel ditransfer dan diimobilisasi pada membran padat, biasanya dibuat dari bahan seperti nilon.Sampel kemudian terpapar probe radiolabel selama beberapa jam sebelum analisis.Selama analisis, mRNA yang telah hibridisasi ke probe radiolabel dapat dideteksi dengan jelas menggunakan sinar-X.

Teknik blotting utara memungkinkan untuk pengamatan pola ekspresi gen antara jenis jaringan yang berbeda.RNA messenger yang diekstraksi dari sel -sel dari berbagai jaringan dan jenis organ yang berbeda dapat dibandingkan, dan respons seluler terhadap stres, infeksi, dan banyak rangsangan lainnya dapat diperiksa.Dengan melihat perbedaan dalam ekspresi mRNA dalam kondisi yang berbeda, seorang ilmuwan dapat menentukan jenis protein apa yang dihasilkan sel sebagai respons terhadap rangsangan tertentu.Ini dapat memberikan petunjuk tentang fungsi protein yang tidak diketahui, atau dalam kasus protein yang diketahui, informasi tentang respons seluler terhadap rangsangan yang dimaksud.

Misalnya, noda utara dapat menunjukkan bahwa ekspresi protein yang tidak diketahui meningkat sebagai respons terhadap adanya toksin tertentu.Maka dapat diteorikan bahwa protein terlibat dalam mengurangi toksisitas, mungkin dengan mengangkut bahan kimia keluar dari sel atau mengubahnya menjadi metabolit.Jika protein yang diketahui sedang diperiksa, mendokumentasikan perubahan dalam ekspresi protein dapat memberikan informasi tentang respons itu sendiri.Jika ekspresi transporter molekuler yang diketahui meningkat, misalnya, dapat dikonfirmasi bahwa respons seluler terhadap toksin adalah untuk mengangkut racun keluar dari sel.