Một blot phía bắc là gì?

Phép lai blot phía bắc là một kỹ thuật được sử dụng để phát hiện mức độ RNA (mRNA) của Messenger trong một mẫu và để định lượng lượng mRNA có mặt.Mặc dù các kỹ thuật mạnh mẽ khác tồn tại, phía bắc blot vẫn là tiêu chuẩn do tính đơn giản và dễ sử dụng.Kỹ thuật làm mờ phương Bắc cũng cho phép so sánh trực tiếp nhiều mẫu trong một thí nghiệm.

Messenger RNA là một loại axit nucleic được sản xuất khi một gen được biểu hiện.Một gen được bật và chức năng trong một tế bào được sao chép thành mRNA.MRNA sau đó được vận chuyển vào tế bào chất của tế bào, nơi nó được dịch thành protein.Do đó, phân tích blot phía bắc của một mẫu mRNA tế bào có thể cung cấp thông tin hữu ích về mảng protein mà tế bào đang tạo ra. Trong một blot phía bắc, mRNA được chiết xuất từ các tế bào và chạy qua một điện di gel agarose biến tính, cho phép mRNA trong mẫuđược phân tách theo kích thước.Các mẫu của các phân tử mRNA có kích thước đã biết được chạy cùng một lúc để cung cấp kiểm soát.Sau khi điện di hoàn tất, các mẫu được chuyển và cố định trên màng rắn, thường được làm từ một vật liệu như nylon.Các mẫu sau đó được tiếp xúc với các đầu dò phóng xạ trong vài giờ trước khi phân tích.Trong quá trình phân tích, mRNA đã lai với đầu dò phóng xạ có thể được phát hiện rõ ràng bằng tia X.Kỹ thuật làm mờ phương Bắc cho phép quan sát các mẫu biểu hiện gen giữa các loại mô khác nhau.RNA thông tin được chiết xuất từ các tế bào của các mô và loại cơ quan khác nhau có thể được so sánh, và các phản ứng của tế bào với căng thẳng, nhiễm trùng và nhiều kích thích khác có thể được kiểm tra.Bằng cách xem xét sự khác biệt trong biểu hiện mRNA trong các điều kiện khác nhau, một nhà khoa học có thể xác định loại protein nào mà một tế bào tạo ra để đáp ứng với một số kích thích nhất định.Điều này có thể cung cấp manh mối về các chức năng của các protein chưa biết, hoặc trong trường hợp các protein đã biết, thông tin về phản ứng của tế bào đối với các kích thích trong câu hỏi.Ví dụ, một blot phía bắc có thể chỉ ra rằng sự biểu hiện của một protein không xác định tăng lên để đáp ứng với sự hiện diện của một độc tố cụ thể.Sau đó, có thể lý thuyết hóa rằng protein có liên quan đến việc giảm độc tính, có lẽ bằng cách vận chuyển hóa chất ra khỏi tế bào hoặc chuyển đổi nó thành một chất chuyển hóa.Nếu các protein được biết đến đang được kiểm tra, việc ghi lại những thay đổi trong biểu hiện protein có thể cung cấp thông tin về chính phản ứng.Nếu biểu hiện của một chất vận chuyển phân tử đã biết được tăng lên, ví dụ, có thể xác nhận rằng phản ứng của tế bào với độc tố là vận chuyển độc tố ra khỏi tế bào.