Ano ang isang hilagang blot?

Ang Northern blot hybridization ay isang pamamaraan na ginagamit upang makita ang mga antas ng messenger RNA (mRNA) sa isang sample, at upang mabuo ang dami ng mRNA na naroroon.Bagaman umiiral ang iba pang mas malakas na pamamaraan, ang Northern blot ay nananatiling pamantayan dahil sa pagiging simple at kadalian ng paggamit.Pinapayagan din ng Northern blotting technique para sa direktang paghahambing ng maraming mga sample sa isang solong eksperimento.

Ang messenger RNA ay isang uri ng nucleic acid na ginawa kapag ipinahayag ang isang gene.Ang isang gene na nakabukas at gumagana sa loob ng isang cell ay na -transcribe sa mRNA.Ang mRNA ay pagkatapos ay dinala sa cytoplasm ng cell, kung saan ito ay isinalin sa isang protina.Ang Northern Blot Analysis ng isang cellular mRNA sample ay maaaring magbigay ng kapaki -pakinabang na impormasyon tungkol sa hanay ng mga protina na ginagawa ng cell.upang paghiwalayin ayon sa laki.Ang mga halimbawa ng mga molekula ng mRNA ng mga kilalang laki ay pinapatakbo nang sabay upang magbigay ng kontrol.Kapag kumpleto na ang electrophoresis, ang mga sample ay inilipat at hindi na -immobilized sa isang solidong lamad, karaniwang ginawa mula sa isang materyal tulad ng naylon.Ang mga sample ay pagkatapos ay nakalantad sa mga radiolabeled probes sa loob ng maraming oras bago ang pagsusuri.Sa panahon ng pagsusuri, ang mRNA na na-hybrid sa isang radiolabeled probe ay maaaring malinaw na napansin gamit ang X-ray.

Ang pamamaraan ng Northern blotting ay nagbibigay -daan para sa pagmamasid ng mga pattern ng expression ng gene sa pagitan ng iba't ibang mga uri ng tisyu.Ang messenger RNA na nakuha mula sa mga cell ng iba't ibang iba't ibang mga tisyu at mga uri ng organ ay maaaring ihambing, at ang mga cellular na tugon sa stress, impeksyon, at maraming iba pang mga pampasigla ay maaaring masuri.Sa pamamagitan ng pagtingin sa mga pagkakaiba -iba sa expression ng mRNA sa ilalim ng iba't ibang mga kondisyon, maaaring matukoy ng isang siyentipiko kung anong mga uri ng protina ang isang cell na ginagawa bilang tugon sa ilang mga pampasigla.Maaari itong magbigay ng mga pahiwatig tungkol sa mga pag -andar ng hindi kilalang mga protina, o sa kaso ng mga kilalang protina, impormasyon tungkol sa mga tugon ng cellular sa pampasigla na pinag -uusapan.

Halimbawa, ang isang hilagang blot ay maaaring magpakita na ang pagpapahayag ng isang hindi kilalang protina ay nagdaragdag bilang tugon sa pagkakaroon ng isang tiyak na lason.Maaari itong ma -teorisado na ang protina ay kasangkot sa pagbabawas ng toxicity, marahil sa pamamagitan ng pagdadala ng kemikal sa labas ng cell o pag -convert ito sa isang metabolite.Kung ang mga kilalang protina ay nasa ilalim ng pagsusuri, ang pagdokumento ng mga pagbabago sa expression ng protina ay maaaring magbigay ng impormasyon tungkol sa tugon mismo.Kung ang pagpapahayag ng isang kilalang molekular na transporter ay nadagdagan, halimbawa, maaari itong kumpirmahin na ang tugon ng cellular sa lason ay upang dalhin ang lason sa labas ng cell.